帮忙分析一下JC-1检测失败的原因

爽籁清风

蓝白小熊 发表于 2012-7-9 08:09

                               
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那你们分析会是什么原因呢？

我们也是强行调了FL2-FL1，看着图还好看点。

wmingzhen

蓝白小熊 发表于 2012-7-9 11:22

                               
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行，我下午试试看，非常感谢。

FL3调到最低，结果如何呢？
我也遇到跟你一样的现象，究竟为何呢？郁闷呢......

wmingzhen

倪老师，请帮忙再分析下，除了FL3 调低，还有哪些因素影响，会出现这种现象呢？着急啊，周四下午要做这个。

niwanmao

wmingzhen 发表于 2012-9-24 17:56

                               
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倪老师，请帮忙再分析下，除了FL3 调低，还有哪些因素影响，会出现这种现象呢？着急啊，周四下午要做这个。 ...

JC-1我帮研究生做过两次，主要是FL1/FL2点图上使正常细胞位于右上角，然后就条件不变，继续取后面的标本。如果没出现降低，往往更多不是获取的问题，有很多种可能：如细胞本来就没发生线粒体膜电位降低，或者没处理好。
当然，为了排除仪器获取的原因造成结果不正确，你也可以用valinomycin处理过的细胞做阳性对照。

wmingzhen

niwanmao 发表于 2012-9-24 19:15

                               
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JC-1我帮研究生做过两次，主要是FL1/FL2点图上使正常细胞位于右上角，然后就条件不变，继续取后面的标本 ...

如果阳性对照和正常细胞都在差不多的位置上，说明阳性没处理好？我今天作的结果跟搂主情况一样。见图。

niwanmao

wmingzhen 发表于 2012-9-24 19:51

                               
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如果阳性对照和正常细胞都在差不多的位置上，说明阳性没处理好？我今天作的结果跟搂主情况一样。见图。 ...

是不是确定是线粒体膜电位降低的标本？如果不是确定降低的，也可能是这个所谓的阳性对照没有发生线粒体膜电位的降低

wmingzhen

niwanmao 发表于 2012-9-24 20:02

                               
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是不是确定是线粒体膜电位降低的标本？如果不是确定降低的，也可能是这个所谓的阳性对照没有发生线粒体膜 ...

谢谢，倪老师。我周四再做一次看看结果如何。

niwanmao

wmingzhen 发表于 2012-9-24 20:05

                               
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谢谢，倪老师。我周四再做一次看看结果如何。

JC-1是有点难做的，染料的配制、染料与标本的混合都需要注意充分，另外细胞的状态也要注意保持较好。  参考一下你以前看过的那个帖子吧：如0.1mM valinomycin或0.25mM carbonyl cyanide m-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone (FCCP) in DMSO

wmingzhen

niwanmao 发表于 2012-9-24 20:10

                               
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JC-1是有点难做的，染料的配制、染料与标本的混合都需要注意充分，另外细胞的状态也要注意保持较好。  参 ...

我们这儿用的碧云天的试剂盒，CCCP为诱导线粒体膜电位下降的阳性对照。

niwanmao

wmingzhen 发表于 2012-09-25 08:03:49

                               
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[quote]niwanmao 发表于 2012-9-24 20:10 [url=forum.php?mod=redirect&go

标本上机前的状态都还好吧？