CFSE细胞增殖分析

niwanmao

浅浅眉 发表于 2012-11-21 22:38

                               
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谢谢您，终于可以发给您了，晚上可以安心睡个觉了。

为什么你每个压缩包里面都有一个一样的对照？怎么不把所有数据放在一起？

大致看了下，transwell细胞太少了，结果不可靠。其它几个只要你确定获取的条件都一样，那么你自己似乎分析也对的，为什么父代几乎都没了，这个问题我也想不通

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浅浅眉

一样的对照是因为我把A549标记CFSE后分成3组，一组作为对照，一组加exosomes，一组transwell与另外一种细胞共培养，48h后收集细胞上机检测。这样的实验设计是不是有问题呢？48h后父代细胞是不是分裂完成，进入子代？有这种可能吗？A549细胞的细胞增殖周期是22小时。如果比较对照和exosomes组的话，哪些数据是用来进行统计学分析呢？简单的说就是比较3组有意义主要是看哪几组数据？是用增生指数和各子代细胞进行比较吗？

niwanmao

浅浅眉 发表于 2012-11-22 07:48

                               
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一样的对照是因为我把A549标记CFSE后分成3组，一组作为对照，一组加exosomes，一组transwell与另外一种细胞 ...

多数文章都用子代占该类细胞总数的比例来表示增殖程度，并且就这个比例来做统计学分析和做图，例如这篇http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC3371025/  文章中，CD4＋细胞子代占所有CD4＋细胞的比例。

但我觉得proliferation index也可以直接拿来用，只要你指明是用这款软件分析的，那么就具备可重复性。

浅浅眉

好像似乎明白一些，我准备再重新做一次试试看，文献上说CFSE标记细胞后要平衡5个小时，我的是贴壁细胞，5小时后会有部分细胞已经贴壁，是不是会有影响？CFSE对细胞活性有影响，怎样排除死亡细胞呢？细胞检测的时序性是不是需要每隔12小时就检测一次呢？还有一个问题是，为什么细胞收集时间长了以后，细胞的比例就会下降？如附件显示。这与收集细胞长短有关吗？还是有其他的原因。今天做了一天实验，刚刚打开电脑，非常感谢倪老师的帮助。

浅浅眉

niwanmao 发表于 2012-11-21 22:53

                               
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能下载的：http://www.flowcyto.cn/bbs/forum.php?mod=redirect&goto=findpost&ptid=1664&pid=6794
会不 ...

软件下载了，云端也下载了，双击软件的时候出现一个从服务器返回的参照，不知道这个是什么情况？没用过云端实在有点小崩溃。

niwanmao

浅浅眉 发表于 2012-11-22 22:25

                               
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软件下载了，云端也下载了，双击软件的时候出现一个从服务器返回的参照，不知道这个是什么情况？没用过云 ...

云端可以保留原版软件的所有配置，所以比较好使用，你是否可以截个图？

浅浅眉

就是这样，双击的时候不能运行。

niwanmao

浅浅眉 发表于 2012-11-23 10:32

                               
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就是这样，双击的时候不能运行。

这个是新版本云端的bug。
删除云端目录下的Cloud.exe.Manifest后，问题一般就可以解决了。

niwanmao

浅浅眉 发表于 2012-11-22 21:51

                               
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好像似乎明白一些，我准备再重新做一次试试看，文献上说CFSE标记细胞后要平衡5个小时，我的是贴壁细胞，5小 ...

死细胞可以用7-AAD来排除

CFSE和7-AAD

浅浅眉

niwanmao 发表于 2012-11-23 12:12

                               
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这个是新版本云端的bug。
删除云端目录下的Cloud.exe.Manifest后，问题一般就可以解决了。 ...

问题解决了，按您所说删除后就可以运行了，膜拜！