教你一招：如何设置实验中的对照？

willow2013

niwanmao 发表于 2014-2-24 19:45
如果其同型一样，这几管就够了，如果CD45的同型与CD73的同型不是一个来源，那么建议再做第6管，搭配同第4 ...

CD45-PE的同型对照与CD73-PE是相同的，我要做的目的是检测这4种直标抗原在细胞表面的表达，您给我的设计只有3个直标抗原，第四个也就是CD45-PE没有用上，所以我想知道CD45-PE要怎么检测呢？

niwanmao

willow2013 发表于 2014-2-26 16:30
CD45-PE的同型对照与CD73-PE是相同的，我要做的目的是检测这4种直标抗原在细胞表面的表达，您给我的设计 ...

CD45和CD73都是PE标记，而且相同来源，可以用同一管FMO对照设门。

willow2013

niwanmao 发表于 2014-2-26 17:37
CD45和CD73都是PE标记，而且相同来源，可以用同一管FMO对照设门。

呵呵！可能我没说清楚，这个同一管FMO对照设门我知道，我的意思是我这四种抗原，之前的搭配只能检测三种，剩下的CD45-PE怎么能检测到，您看下你帮我设计的管中没有检测CD45-PE的，我加下，您看看可以吗
1管——3种同型对照（调节电压）
2管——CD73-PE+CD105APC+同型-FITC
3管——CD73-PE+CD146-FITC+同型-APC
4管——CD146-FITC+CD105APC+同型-PE
5管——CD73-PE+CD105APC+CD146-FITC（检测管）

6管——CD45-PE+CD105APC+CD146-FITC（检测管）
我的这支第六管设计来测CD45-PE，可以吗？

niwanmao

willow2013 发表于 2014-2-27 08:38
呵呵！可能我没说清楚，这个同一管FMO对照设门我知道，我的意思是我这四种抗原，之前的搭配只能检测三种 ...

这个要看你的实验设计，这样是可以，不过如果设门只是单纯根据FSC/SSC的话，其实你设计成4色方案更好，更节省抗体。

willow2013

niwanmao 发表于 2014-2-27 18:14
这个要看你的实验设计，这样是可以，不过如果设门只是单纯根据FSC/SSC的话，其实你设计成4色方案更好，更 ...

哦，谢谢倪老师！
我本来是设计4色的，但是测流式的老师说，第四种荧光他们的机子检测不了，所以就改了

willow2013

niwanmao 发表于 2014-2-27 18:14
这个要看你的实验设计，这样是可以，不过如果设门只是单纯根据FSC/SSC的话，其实你设计成4色方案更好，更 ...

倪老师，样品制备的时候，最后用1%多聚甲醛固定，1）需要洗吗？洗几遍，需要注意什么呢？2）1%多聚甲醛需要抽滤除菌吗？
我查了一些，说法不一样，想问您确定下，谢谢

niwanmao

willow2013 发表于 2014-2-28 12:23
倪老师，样品制备的时候，最后用1%多聚甲醛固定，1）需要洗吗？洗几遍，需要注意什么呢？2）1%多聚甲醛需 ...

如果能及时检测，其实还是不用多聚甲醛固定的好。
配制的多聚甲醛不需要除菌。
你所说的洗涤是干啥用？固定之前？

willow2013

niwanmao 发表于 2014-2-28 20:16
如果能及时检测，其实还是不用多聚甲醛固定的好。
配制的多聚甲醛不需要除菌。
你所说的洗涤是干啥用？固 ...

多聚甲醛固定之后，是不是需要洗呀？要注意什么？

niwanmao

willow2013 发表于 2014-3-3 15:50
多聚甲醛固定之后，是不是需要洗呀？要注意什么？

不用，因为你固定前已经洗涤过标本了

simnprince

真是好帖子，刚加进来不久，多多关照