磁珠分选有没有特别的注意事项？

liliqianyi

samly0 发表于 2013-11-20 15:20

                               
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不是整体减少的，根据抗原表达强弱减，比如说分选CD4+这种表达高的，就多加点抗体，分选CD25+这种表达少的 ...

嗯  谢谢您的回复！！！
我还是得好好摸索一下！

liliqianyi

samly0 发表于 2013-11-20 15:20
不是整体减少的，根据抗原表达强弱减，比如说分选CD4+这种表达高的，就多加点抗体，分选CD25+这种表达少的 ...

samlyo老师，近期我做的treg分选纯度还不错，但是发现阳选后，从柱子打下来的treg细胞，台盼蓝染色，挺多死细胞，本来细胞就很少。不知道你是否遇见这种情况。
我的细胞接下来还有培养，扩增的效果很不好（CD3/CD28 microbeads，il-2），基本上都不长，不知道你们培养这个细胞吗，效果如何。
谢谢了！

dragonhzqsmmu

samly0 发表于 2013-6-8 17:35
其实都是用抗原跟特异性的抗体结合的原理来分选细胞，只是一个用磁珠拉，一个用流式机子拉，排除机器和人 ...

200块算便宜的啦，我们这边要到中科院系统去做，因为是外单位的，一小时1200元，伤不起啊

olivezhou0716

63735523 发表于 2013-5-25 19:53
那阴选怎么提高纯度，也是再过柱么

去除分选有一个很重要的注意事项就是：所有非目的细胞的抗体都要有且量要充分。商品化的分选试剂盒设计时肯定都会考虑到各组分细胞的比例和抗体的实际用量。但有些情况下，比如：1.试剂盒建议的以为的组织（如人的分选试剂盒多针对外周血，如果分肝脏或肺脏就无法去除其中的组织特异性细胞）；2.发生疾病或其它药物处理后的组织（如有些白血病病人外周血细胞比例发生比较大的变化，导致去除不完全），去除的纯度则无法保证。
另外一个比较重要的注意事项是：柱子选择。MS和LS柱的上样量是2*108和2*109，最大滞留量是：107和108，对于阳选算好比例，两个数字都不超过就行了；对于去除分选不仅要注意这两项，细胞数量很高，接近滞留最大数量（哪怕不高于），纯度也不会太好；建议选择较大的分选柱来分选。

olivezhou0716

niwanmao 发表于 2013-6-8 16:44
@samly0   按照你的经验，流式的分选纯度高还是磁珠的分选纯度高？

纯度受到的影响因素太多，很难说一定是哪个技术效果更好。
我们很多人看分选结果最关注的还是纯度，其实除了纯度还有很多潜在的因素是非常重要的，比如细胞的活性、细胞的活化状态有无改变、细胞的功能变化等等，这些因素相对难以直观检测，所以很多人会忽略。绝大多数的情况下是，磁珠的分选对细胞的影响是更小的，加上安全性的因素，所以临床上回输给病人的分选细胞都是通过磁珠来做的。

sunjunapple

之前也用美天旎免疫分选磁珠，特别是分选比例比较低的细胞群，结果不是特别理想，但现在改用是Stem cell 公司的easy-step 分选试剂盒，挺好用的，无论阴选还是阳选流式检测比例都达到98%以上，并且操作特别easy，和大家分享一下，希望对大家有帮助，http://www.stemcell.com

samly0

sunjunapple 发表于 2014-3-12 10:03
之前也用美天旎免疫分选磁珠，特别是分选比例比较低的细胞群，结果不是特别理想，但现在改用是Stem cell 公 ...

我也正准备试试这个试剂盒

椴树

我想问下，我是转染后去分选，细胞有一半死亡，会不会堵柱子，如果去除死细胞再过柱子的话，我细胞得率会不会很少，因为这样就要多过次去死细胞的柱子。PS： 镜下看细胞阳性率可能不足10%。

niwanmao

椴树 发表于 2014-6-25 17:23
我想问下，我是转染后去分选，细胞有一半死亡，会不会堵柱子，如果去除死细胞再过柱子的话，我细胞得率会不 ...

堵我觉得应该不会，但得率肯定很低。 @samly0   @olivezhou0716  

钢蛋儿

samly0 发表于 2014-3-14 14:23
我也正准备试试这个试剂盒

请问分选人外周血CD4+ T细胞建议阳选还是阴选？只有2*10^7个细胞是不是应该选择MS柱子？美天旎和stem cell相比应该选择哪个？谢谢哦