流式检测转染效率

桃小丁

我用流式检测转染效率，以未转染的为阴性对照划分阴阳界限，但是转染组得出来的的结果也只有一个峰，峰中心线在阴阳界限左或右侧，与文献所见明显两个峰不同，请问各位战友这是为何？

niwanmao

没有转染好？看到的偏移或许只是因为细胞状态不同而导致的非特异性荧光

桃小丁

niwanmao 发表于 2014-7-7 19:42
没有转染好？看到的偏移或许只是因为细胞状态不同而导致的非特异性荧光

这样吗？因为没有荧光显微镜，所以只能用流式摸索转染条件，我也不知道转进去没有~~~

niwanmao

桃小丁 发表于 2014-7-7 20:58
这样吗？因为没有荧光显微镜，所以只能用流式摸索转染条件，我也不知道转进去没有~~~ ...

我们这边也有研究生做转染，主要是GFP标记，基本上都是很好的双峰，不过阴性峰跟空白对照相比也是有不小程度的右移，所以我怀疑你所说的可能仍是阴性峰，应该是没有转进去。

桃小丁

niwanmao 发表于 2014-7-7 21:04
我们这边也有研究生做转染，主要是GFP标记，基本上都是很好的双峰，不过阴性峰跟空白对照相比也是有不小 ...

但是FL1 的平均荧光值是有增加趋势的，您看有没有这种可能，每个细胞转染进去的基因并不均一，是一个逐级变化的过程，导致转染的细胞并未出现一个峰？我是用lipofectamine 3000转染带FAM标记的mimic NC

niwanmao

桃小丁 发表于 2014-07-08 12:02:49

                               
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但是FL1 的平均荧光值是有增加趋势的，您看有没有这种可能，每个细胞转染进去的基因并不均一，是一个逐级

这个可能不大，既然文献也是双峰，那么表达上就不会存在慢慢表达。

桃小丁

niwanmao 发表于 2014-7-8 13:42
这个可能不大，既然文献也是双峰，那么表达上就不会存在慢慢表达。

在文献中看到一个流式检测转染效率的图，与我结果相似，您觉得可信吗[img][/img]

桃小丁

桃小丁 发表于 2014-7-8 16:52
在文献中看到一个流式检测转染效率的图，与我结果相似，您觉得可信吗[/img] ...

图片上传不了o(╯□╰)o

叶绿素

上个图看看吧，包括阴性对照的一起

niwanmao

桃小丁 发表于 2014-7-8 16:56
图片上传不了o(╯□╰)o

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