CD3单阳管CD3+细胞多，但所以样本管几乎都没有CD3+细胞，求教

piaolingkl

第一张是CD3单阳管，CD3阳性和阴性细胞有明显的分开，但我的样本管都是如第二张图片，几乎没有CD3+细胞，这是什么问题呢，我操作是先没管取400ul样本后，剩余的样本分装到CD3,CD4.CD8单阳管，CD3单阳管就是加了10UL小鼠血清封闭后，加FAX bufer100ul.和CD3+percp抗体3ul,而样本管是没管加10UL小鼠血清封闭10min后，配FAX buffer加CD3PERCP.CD4FITC，CD8PE 混合液后，每个管子加100ul，是不能这样操作，要每个管子单独加抗体吗？

niwanmao

我怀疑：
1、FSC/SSC设门问题
2、抗体质量问题。

piaolingkl

niwanmao 发表于 2014-12-2 10:28
我怀疑：
1、FSC/SSC设门问题
2、抗体质量问题。

老师，这是我FSC/SSC设门，您看是否有误，抗体的话，每个管子加的抗体都是来源于同一瓶抗体，第一张图是CD3单阳管，第二张是所以样本图，第三张是其中一个样本管图，我是用CD3单阳管设好门后，把这个门应用于所以样本。取的组织是肠道的peyer结，每只小鼠都是取5-6个来做，用的是用一次性注射器的塑料活塞来研磨制备单细胞悬液

niwanmao

piaolingkl 发表于 2014-12-2 11:05
老师，这是我FSC/SSC设门，您看是否有误，抗体的话，每个管子加的抗体都是来源于同一瓶抗体，第一张图 ...

细胞状态不好。
你试试先不设门，圈CD3＋细胞，然后再反过去看这些细胞在FSC/SSC散点图上的位置。

piaolingkl

niwanmao 发表于 2014-12-2 11:53
细胞状态不好。
你试试先不设门，圈CD3＋细胞，然后再反过去看这些细胞在FSC/SSC散点图上的位置。 ...

发现样本管细胞分群也不明显

niwanmao

piaolingkl 发表于 2014-12-2 14:00
发现样本管细胞分群也不明显

我刚才说设好CD3＋的门之后，再看这些细胞在FSC/SSC散点图上的位置，我估计你之前圈的不是淋巴细胞。如果你不会，传一个文件上来即可。