naive T诱导iTreg

Victorrwang

暖希贤 发表于 2016-5-6 16:28
能具体讲一下么？谢谢

看了一下标题，发现我跑题了。你做treg不需要pma／ionomycin的激活，因此不存在丢失cd4的情况。除了信号弱一点，我觉得你的数据应该没啥问题

在检测cytokines的时候因为pma/ionomycin的刺激会导致细胞丢失cd4以及其他一些表面分子，所以有些聪明的人想到在刺激前先把cd4染上，这样即使内吞了也还是能检测到。
我本人没试过这个方法是否可行。

niwanmao

暖希贤 发表于 2016-5-6 16:24
老师，不可能大部分是CD4+么？我这个本来就是分离的CD4+t细胞

磁珠分选？那难怪，不过分选好测过没有？一般即使分选好也会有一些阴性的群体存在吧。

Victorrwang

niwanmao 发表于 2016-5-7 08:30
磁珠分选？那难怪，不过分选好测过没有？一般即使分选好也会有一些阴性的群体存在吧。 ...

对哦，要是用的是cd4 positive selection，那难怪染不上cd4了

暖希贤

Victorrwang 发表于 2016-5-7 08:46
对哦，要是用的是cd4 positive selection，那难怪染不上cd4了

请问一下，CD4阳选染不上CD4是什么意思？

暖希贤

niwanmao 发表于 2016-5-7 08:30
磁珠分选？那难怪，不过分选好测过没有？一般即使分选好也会有一些阴性的群体存在吧。 ...

分选后检测CD4+90%多，这图是没染上fitc-CD4么?谢谢老师

niwanmao

暖希贤 发表于 2016-5-9 15:52
分选后检测CD4+90%多，这图是没染上fitc-CD4么?谢谢老师

如果这个图形和你分选后的检测结果荧光强度位置类似，那么可认为是CD4阳性，只是我就是很奇怪，为什么阴性一点都没有？按道理总会有一小部分阴性的细胞留着

Victorrwang

暖希贤 发表于 2016-5-9 15:49
请问一下，CD4阳选染不上CD4是什么意思？

如果是用kit 做cd4阳性选择，那在选择过程中就已经用到了cd4 antibody。选择后的cd4已经结合上抗体。 即便是用于选择的单抗和你染色的单抗识别的表位不同，但由于抗体有一定的体积，用于染色的抗体很难再结合上去。做cell differentiation一般都得培养几天，原来细胞上的cd4抗体可能会掉一点，细胞本身可能也会表达一点新的。所以你会看到cd4 的表达稍微shift了一点，而不是明显的阳性信号。