流式分选后细胞存活率问题

steven

niwanmao 发表于 2016-10-5 11:24
不会这样的，变成悬浮之后不能再贴壁就说明细胞出问题。

HSC的纯化和培养我也没有实际经验，我刚才找到 ...

谢谢老师，我就是按照这篇文章做的分离，但是他们用的是小鼠，我用的是大鼠，药物用量和时间上稍微有些不同，也参照过其他很多篇文章，基本流程应该没有问题，现在就不知道问题在哪里，因为流式分选前后细胞状态有很大不同，所以一开始考虑是流式分选过程中出问题了，但现在看来好像也不应该。

wqlh168

请问你的这个细胞大小，大概是多少um呢？

niwanmao

wqlh168 发表于 2016-10-7 16:57
请问你的这个细胞大小，大概是多少um呢？

一般应该是25～50um，参见http://www.nature.com/articles/ncomms3823/figures/2中的图，标尺是100um，图中是HSC大约在1/3～1/2之间。

steven

wqlh168 发表于 2016-10-7 16:57
请问你的这个细胞大小，大概是多少um呢？

谢谢你的提问。
大鼠肝星状细胞一般文献报道14um左右，我自己亲自测20um左右，肝细胞30um左右。

JennyS

mark学习了，流式新人，感觉大家棒棒的！！！

steven

JennyS 发表于 2016-10-16 10:45
mark学习了，流式新人，感觉大家棒棒的！！！

加油

hellenli

近期几次分选也发现细胞养在培养瓶里的不易贴壁，有的甚至两三天都不贴，但是养在孔板里的（有6孔或96孔）一晚就可以贴壁，不知道是细胞密度的缘故还是培养皿的问题

niwanmao

hellenli 发表于 2016-12-1 14:56
近期几次分选也发现细胞养在培养瓶里的不易贴壁，有的甚至两三天都不贴，但是养在孔板里的（有6孔或96孔） ...

抱团取暖

hellenli

niwanmao 发表于 2016-12-1 15:29
抱团取暖

后面又用常规PBS和我们鞘液（血细胞稀释液）分别浸泡细胞2h后培养，鞘液浸泡过的确实不贴壁成型，鞘液里面的一些成分确实会影响细胞活性，以后还是乖乖买PBS配制过滤灭菌真的是体力活啊

steven

hellenli 发表于 2016-12-21 10:13
后面又用常规PBS和我们鞘液（血细胞稀释液）分别浸泡细胞2h后培养，鞘液浸泡过的确实不贴壁成型，鞘液里 ...

难道我分选的细胞不容易贴壁也是鞘液的问题？可是aria III的鞘液桶是连在机器上的不能换吧。。。而且大家分选别的细胞好像没出现过这种问题，都是BD自家的鞘液。