同型对照荧光比抗体强，咋办？阻断！

圈圈O2

老师你讲的好好！我实验就是又用阻断剂又做同型对照，之前一直不明白，看了你的文章恍然大悟。因为我的细胞是单核白血病细胞，染色抗体又用的IgG1。谢谢老师~

windskj

所以还是在多色T淋巴时，注意补偿和FMO即可。省钱啦~

moreorless

倪老师，请问封闭结束后是否需要洗，还是可以直接标目的抗体？

niwanmao

moreorless 发表于 2019-8-13 17:35
倪老师，请问封闭结束后是否需要洗，还是可以直接标目的抗体？

不需要洗，直接染。

2627443

niwanmao 发表于 2016-12-19 08:15
可以。效果肯定是Fc Block好。

倪老师，那如果要检测单核细胞或者巨噬细胞的话，那是否就不能使用Fcblocking了？检测这些细胞就尽可能选用一些IgG2b亚型的抗体？

niwanmao

2627443 发表于 2019-11-1 15:53
倪老师，那如果要检测单核细胞或者巨噬细胞的话，那是否就不能使用Fcblocking了？检测这些细胞就尽可能选 ...

也可以用，阻断的点不是检测抗体结合位点。
但是，对于分群清楚的抗原，我觉得没必要阻断，因为分群足够设门了。

2627443

niwanmao 发表于 2019-11-1 21:23
也可以用，阻断的点不是检测抗体结合位点。
但是，对于分群清楚的抗原，我觉得没必要阻断，因为分群足够 ...

好的，明白了，谢谢倪老师~

西府海棠121

老师您好！我做人单核细胞白血病细胞系U937的分化，用的是Biolegend的IgG1的CD11b抗体（CD11b确实没有IgG2b的），之前确实有发现标了iso比空白管APC荧光更强的现象，所以根据您这边的建议买了BD的Fc block。按说明书1X10^6细胞先加了2.5μg的Fc block室温封闭10min后再分别标5μL的CD11b IgG1 iso和CD11b的抗体，半小时后洗2次上机（BD LSR）。由于相对比Fc block的效果，因此做了不加block只加抗体的对照。结果非常奇怪：空白管、iso和iso+block管的CD11b水平基本无差别，但CD11b+block比单标CD11b的细胞分化更多！不知道如何解释了……

niwanmao

西府海棠121 发表于 2020-1-6 11:12
老师您好！我做人单核细胞白血病细胞系U937的分化，用的是Biolegend的IgG1的CD11b抗体（CD11b确实没有IgG2b ...

分群效果如何？最好把图放上来吧。

五味瓶JJJ

老师，文章链接出现错误，打不开啊