样品是否需要刺激或者加BFA

niwanmao

多纳泰罗豪 发表于 2020-6-9 16:39
老师您好，我看文献中都是刺激结束前的一小时加，BFA提前加会对细胞有大的影响吗 ...

BFA主要是对CD69的表达有影响。要测细胞因子，目前商品化试剂盒通常建议一起加。

112358answer

niwanmao 发表于 2017-12-31 22:35
如果你想直接看，那么可以直接收集后检测IFN-g。
那些体外刺激的是想看T细胞的功能。 ...

“直接收集后检测IFN-g”
IFN-g不都分泌出去了吗？直接检测怎么操作？

niwanmao

112358answer 发表于 2020-6-15 17:20
“直接收集后检测IFN-g”
IFN-g不都分泌出去了吗？直接检测怎么操作？

需要在培养的时候预先以BFA等阻滞刺激的。
这里的意思是不需要额外刺激，不是说不加BFA。

112358answer

niwanmao 发表于 2020-6-16 07:55
需要在培养的时候预先以BFA等阻滞刺激的。
这里的意思是不需要额外刺激，不是说不加BFA。 ...

分离到体外之后，原本体内的刺激不都消失了么，还能检测到细胞因子的表达吗?

niwanmao

112358answer 发表于 2020-6-16 15:46
分离到体外之后，原本体内的刺激不都消失了么，还能检测到细胞因子的表达吗? ...

能

immunology1988

BFA需要跟刺激物一起加，BFA主要是阻断细胞内因子外分泌出细胞外。

shiyisyl

请问总共要刺激是18小时，再染色做流式。在刺激10小时后再加，对细胞因子检测有影响吗

niwanmao

shiyisyl 发表于 2022-4-13 06:59
请问总共要刺激是18小时，再染色做流式。在刺激10小时后再加，对细胞因子检测有影响吗 ...

可以比对一下看看吧。现在那些商品化的预混刺激干粉，基本上是三种刺激和阻断因子分泌的都在一起。