流式检测IL-10的刺激方法

niwanmao

Cleopatra 发表于 2019-7-16 19:30
倪老师，参照文章建议尝试了下，但是影响其他胞内因子表达量，对IL-10影响无明显变化，不甚理想 ...

之前其它胞内因子分群明显吗？如果有可能看一下图最好。

Cleopatra

niwanmao 发表于 2019-7-17 10:35
之前其它胞内因子分群明显吗？如果有可能看一下图最好。

参照您之前推荐的文献，设置了Monensin浓度梯度，条件及结果如图所示，Marker：CD3-APC-Cy7；CD8-APC；IFN-r-FITC；IL-10-PE-Cy7

stf1990

会不会是PMA不适用于刺激细胞产生IL－10？Biolegend的技术员给出的指导认为humanI IL－10刺激最好用LPS

小外星人

晕啊，看IL-10咋能不加LPS呢。。。真对不起，之前回答过这个问题但没注意到没加LPS。。。
要在PMA, 离子霉素，莫能霉素，BFA基础上，加上LPS~~~~~我小鼠的淋巴细胞加LPS是用10ug/ml。但是人的PBMC，要参考下文献。

小外星人

一枝孤芳 发表于 2019-4-12 10:04
肝素管收集患者全血，于含250ul1640培养基的孔板加入250ul全血（或250ul单核细胞）,并加入PMA（50ng / mL） ...

晕啊，看IL-10咋能不加LPS呢。。。真对不起，之前回答过这个问题但没注意到没加LPS。。。
要在PMA, 离子霉素，莫能霉素，BFA基础上，加上LPS~~~~~我小鼠的淋巴细胞加LPS是用10ug/ml。但是人的PBMC，要参考下文献。

Cleopatra

小外星人 发表于 2019-7-23 21:51
晕啊，看IL-10咋能不加LPS呢。。。真对不起，之前回答过这个问题但没注意到没加LPS。。。
要在PMA, 离子霉 ...

CD14在加入LPS刺激活化后会不贴壁吗？因为收细胞的时候只收了悬浮细胞，也尝试了LPS（1ug/mL 8h）+Mix（PMA+Ionomycin+Monensin 5h），IL-10无明显增多

stf1990

小外星人 发表于 2019-7-23 21:52
晕啊，看IL-10咋能不加LPS呢。。。真对不起，之前回答过这个问题但没注意到没加LPS。。。
要在PMA, 离子 ...

请问10ug/ml的LPS是最终浓度吗
刺激时间依然是5h吗，效果如何？

stf1990

Cleopatra 发表于 2019-7-24 09:55
CD14在加入LPS刺激活化后会不贴壁吗？因为收细胞的时候只收了悬浮细胞，也尝试了LPS（1ug/mL 8h）+Mix（P ...

为啥只收悬浮细胞，不收贴壁细胞，是有什么其他要求吗

Cleopatra

要测的是淋巴细胞亚群，它不贴壁的呀

小外星人

stf1990 发表于 2019-7-25 16:42
请问10ug/ml的LPS是最终浓度吗
刺激时间依然是5h吗，效果如何？

对，终浓度10ug/ml， 5小时，挺好。