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楼主: 小小一铁匠

[凋亡检测] 帮忙看看做的这个凋亡,补偿调不好,FITC单染没有正常细....

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 楼主| 发表于 2019-9-19 17:48:31 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2019-9-8 23:02
这不叫电压相差那么大。电压你不应该变动的,准确的说是FITC向右偏了,这很正常。
把补偿调好,就可以设 ...

您是说可以直接调节补偿是么
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发表于 2021-1-16 11:51:29 | 显示全部楼层
小小一铁匠 发表于 2019-9-19 17:48
您是说可以直接调节补偿是么

对,象AV/PI这个检测,非常简单,按横平竖直原则。
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发表于 2021-5-3 21:17:17 | 显示全部楼层
老师,我也遇上了一样的问题,想请教一下
1、为什么Annexin V/PI的双染样本,没必要做单阳性参照就能直接调呢?我用的是Annexin V FITC-PI。的确我自己没有根据单染组,瞎调电压能让它分出很漂亮的三群。
2、我的无凋亡组,也就是正常细胞双染,调节FITC和PI的电压到10^3以内,以此为画十字门,作为阳性阴性的分隔,然后上凋亡组,整体细胞群的偏移很大,那我的十字门是应该以我分群的情况去画是么?就不需要参考无凋亡组画的门了?
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发表于 2021-5-4 08:39:11 | 显示全部楼层
山楂李话梅 发表于 2021-5-3 21:17
老师,我也遇上了一样的问题,想请教一下
1、为什么Annexin V/PI的双染样本,没必要做单阳性参照就能直接调 ...

1、因为发生凋亡和坏死的细胞,在染色强度上和阴性细胞群分得非常开。根据业内原则,分群清楚的实验 ,不需要设置对照。
2、整体细胞群偏移,是因为实验组进行了其它处理,所以细胞状态发生了改变,因为本底荧光水平就不一样了,因此,设门不需要参考未处理的细胞。
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发表于 2021-5-30 21:45:01 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-5-4 08:39
1、因为发生凋亡和坏死的细胞,在染色强度上和阴性细胞群分得非常开。根据业内原则,分群清楚的实验 ,不 ...

设门不需要参考未处理的细胞的话,是不是未处理的细胞的双染就没必要测了?只上空白调下电压,上处理的双染组调好补偿后就可以直接收集了?
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发表于 2021-5-31 07:43:36 | 显示全部楼层
闷油瓶 发表于 2021-5-30 21:45
设门不需要参考未处理的细胞的话,是不是未处理的细胞的双染就没必要测了?只上空白调下电压,上处理的双 ...

一切都以经验为基础,只要有经验,可直接上双染样本。因为双染样本里面,各个群体几乎都在(当然死的很多的样本除外)。
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