PMBC提取的经验及问题讨论

一成天 · 发表于 2011-3-25 22:38:35

最近又做了一次。情况是这样：两名病人，第一名采血时间大约在6点，取回后水平放置；第二名采血时间在9点40 ...
chujindong 发表于 2011-3-13 22:47

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请教下，文中所说采血后水平放置，意思是将试管平躺放在桌面上吗？

chujindong · 发表于 2011-3-26 21:25:39

本帖最后由 chujindong 于 2011-3-26 21:26 编辑

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现在我是在泡沫板上掏出两个槽，把采血管放进去（水平的），然后放到摇床上轻摇

孙思源 · 发表于 2011-5-1 09:07:05

采血后护士轻轻颠倒混匀若干次就可以了吧？

离心机转速：实验室离心机的半径有关。可以用生物学手册中的离心力和转速换算表来查算二者的换算关系。上万转的离心可能太高了，估计是小型的台式机。比较大的大家伙，3oooRPM已经很好了啊。

分层液的使用，离心力或转速似乎也不宜太高。我对血样进行稀释后，1600RPM,8MIN，貌似很好。当然离心机半径也比较大。用的是玻璃管。

就这样，第一次跟帖，谢谢

dragonhzqsmmu · 发表于 2011-5-4 09:26:20

chy 发表于 2011-3-16 22:24

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阿氏液（Alsever液），配方如下：
枸橼酸钠（Na3C6H5O7?5H2O） 0.80g
枸橼酸 0.0325g

请教一下，我们没有高压灭菌，可以0.22um无菌滤器抽滤除菌吗？多谢

mylive · 发表于 2011-5-20 08:23:10

本人觉得离心机的性能对其影响也比较大。。

dragonhzqsmmu · 发表于 2011-5-22 20:02:09

本帖最后由 dragonhzqsmmu 于 2011-5-22 20:05 编辑

aninawang 发表于 2011-3-11 21:23

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最好是新鲜血，象前述描述的这种红细胞混在PBMC层的情况我也遇到过，怀疑是个体的血液不好，还有就是水平离 ...

国产的我们用的是天津产的，进口的分离液，老师有没有哪家价廉物美推荐的？实验室用量很大，想省点用
另外我们是使用肝素抗凝收全血，先分血浆冻存，然后用PBS以1:1比例稀释红细胞悬液，再用ficoll分离PBMCs，ficoll和细胞悬液的比例是1:1，使用15ml离心管分离，各位老师有没有更好的建议？

aninawang · 发表于 2011-5-24 17:29:50

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进口的ficoll一般价格要高于国产好几倍，如果用量大还是国产的经济些，国产也不是不能用，就是细胞损失较进口多些，对细胞数量没有限制或是标本不是很稀有的话，国产也可以的。
如果血浆已经吸取出保存，PBS最好稍微多加些，可以达到1.5-2:1都没有关系的。
希望对你有所帮助。

chujindong · 发表于 2011-5-30 18:40:57

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我们一般不用同一管血分血浆、分PBMC。一般是分血浆用一管血，分完即弃；分PBMC用一管血。据说国外实验室是这么做的。
听说有些人像你这样做过，也能做出来。本人也试过，有成功有失败。现在一般不这么用血了。
国产的还没用过。用的是sigma的，确实比国内贵不少。

chujindong · 发表于 2011-5-30 18:45:07

回复孙思源的帖子

8min就能分离出PBMC吗？简直不可思议！
我用sigma的，要转30Min,时间短了分不出来。
不知你用的是哪家公司产的？

CRP · 发表于 2011-7-25 20:44:45

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请问您吸取白膜层时，一般取多少？可以吸的很干净吗？如果有血小板，该怎么除去？

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