PMBC提取的经验及问题讨论

chujindong · 发表于 2011-7-29 15:43:59

回复 CRP 的帖子

如果吸得好的话自然是可以吸干净的。如果吸不干净的话就把分离液层多吸一些，加洗涤液（PBS or saline solution or 1640)时多加一些就行了，转速要比一般洗细胞时大一些。至于血小板，确实是很难去除的，但如果你是用于流式分析，这是影响不大的，毕竟上了机你要的细胞很容易跟其他碎片分群。

huanghyes · 发表于 2011-10-11 13:09:08

我很像知道有没有直接往抗凝血里加固定液，然后再分离了PBMC，可以这样做吗？因为我的血液要运输，但里面的细胞要控制在2h的状态时，谢谢啦？

xyhongjin · 发表于 2011-11-2 23:58:15

学习了，真是细节决定成败呀！

xyhongjin · 发表于 2011-11-21 23:39:54

chujindong 发表于 2011-3-23 21:22

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感谢各位战友！目前本人已掌握该技术。
感觉须特别注意以下三点：
1、采血后抗凝一定要充分，不立即处理时 ...

请问如果放置时间过长，会对结果造成什么影响呢？

chujindong · 发表于 2011-11-22 18:34:14

xyhongjin 发表于 2011-11-21 23:39

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请问如果放置时间过长，会对结果造成什么影响呢？

时间长了，分出来的细胞状态不好。分离也本身也是对细胞有毒性的。

chujindong · 发表于 2011-11-22 18:36:08

huanghyes 发表于 2011-10-11 13:09

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我很像知道有没有直接往抗凝血里加固定液，然后再分离了PBMC，可以这样做吗？因为我的血液要运输，但里面的 ...

抱歉，没看到回复。不知道问题是如何解决的？

yuchuan · 发表于 2011-12-13 18:02:24

很不错，学习了

爱白衣杀手 · 发表于 2015-3-16 21:35:43

chujindong 发表于 2011-3-23 21:22
感谢各位战友！目前本人已掌握该技术。
感觉须特别注意以下三点：
1、采血后抗凝一定要充分，不立即处理时 ...

请问所谓复温是什么意思？恢复到25度吗？这一点很重要吗？

lypzy1221 · 发表于 2015-3-17 09:02:11

CRP 发表于 2011-7-25 20:44
回复 chujindong 的帖子

请问您吸取白膜层时，一般取多少？可以吸的很干净吗？如果有血小板，该怎么除去？ ...

可以洗涤一遍后，再次用低速（200g，5min）洗涤，可去除血小板。

lypzy1221 · 发表于 2015-3-17 09:03:31

血液过夜后样本中PBMNC分出来应该是没问题的，我试过很多次，但是样本如果过夜，表型会有较大的变化，如CD4、CD19等

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