TAM需要事先从肿瘤单细胞悬液中分离出来吗？

yiyicao

我想问一下我想测肿瘤组织中肿瘤相关巨噬细胞极化的问题，需要先流式分选或者磁珠分选TAM吗？还是肿瘤制备成单细胞悬液之后就可以了。不需要单独把TAM富集出来？

niwanmao

如果要诱导极化的话，可能富集和分选出来更合适

YC5125

我想问一下，有TAM分离和富集的protocol吗，我也是做极化的，感激不尽！！！

Climber

YC5125 发表于 2022-4-12 19:50
我想问一下，有TAM分离和富集的protocol吗，我也是做极化的，感激不尽！！！ ...

分选或者纯化对仪器和试剂的消耗量是不是太大了，用percoll进行密度梯度离心的方式会不会比较好呢 这篇文章可能会有介绍 但是目前我下载不到了Polverini PJ, Leibovich SJ. Induction of neovascularization in vivo and endothelial proliferation in vitro by tumor-associated macrophages. Lab Invest. 1984 Dec;51(6):635-42. PMID: 6209469.

zjjxqsm2008

我有同样的疑问，是不是可以直接通过M1 M2的标志物染色区分，直接富集TAM有没有比较好的分选策略？

麦小光

如果只是检测极化，我建议直接死活-CD45-CD11b-F4/80之后直接测cd163之类的，这样其实方案也在6色内，比较好调，成本也不高，操作也比较方便，但是前提是你的消化这一步要做好。 如果需要顺便测蛋白或者TAM里面QPCR检测，那还是磁珠分选吧，便宜快捷，机器分选不是很推荐，反正我们那个机器挺慢的，TAM在肿瘤组织里面含量不高，也就百分之几，如果流式分选，一个样本可能就要一两个小时，（反正我们那个机器挺慢的）。这样随便几组样本，一天就过去了，很影响细胞状态的，成本也高（我们是400一个小时）。

范晋波

YC5125 发表于 2022-4-12 19:50
我想问一下，有TAM分离和富集的protocol吗，我也是做极化的，感激不尽！！！ ...

先用流式染色看一下，如果含量在1-2%以上，完全可以用流式直接测，不用分选，如果含量过低，可以用磁珠进行分选，分选方法可以私信我

范晋波

可分可不分，看流式结果