CFSE检测淋巴细胞增殖CD3内吞问题

南瓜妹妹

RIVA 发表于 2020-5-19 10:59
确实是感觉CFSE加少了

CSFE的浓度不低5um

niwanmao

南瓜妹妹 发表于 2020-5-23 10:03
①提前一天包板：每孔的量为0.2ug CD3单抗+0.2ug CD28单抗，溶解在50ul的PBS里，然后把PBS加到96孔板孔里 ...

自己包板，很可能造成CD3抗体仍有游离的在。
一般包板完成，尽量用最大的体积，洗三次。
我觉得CD3最后的染色降低，很可能跟有游离CD3还在有关，因为竞争性结合导致荧光素CD3结合量减少，从而导致最后的CD3分群不清。所以你先从洗板那里着手改善一下，用最大的体积PBS洗涤三次。

南瓜妹妹

niwanmao 发表于 2020-5-23 10:26
自己包板，很可能造成CD3抗体仍有游离的在。
一般包板完成，尽量用最大的体积，洗三次。
我觉得CD3最后的 ...

好的，谢谢倪老师！

yuqzhuo@163.com

niwanmao 发表于 2020-5-23 10:26
自己包板，很可能造成CD3抗体仍有游离的在。
一般包板完成，尽量用最大的体积，洗三次。
我觉得CD3最后的 ...

想问一下，CD3/CD28抗体刺激不会对后续的CD3染色有影响吗？

niwanmao

yuqzhuo@163.com 发表于 2021-4-20 10:09
想问一下，CD3/CD28抗体刺激不会对后续的CD3染色有影响吗？

不会，因为CD3/CD28要么是包被在板子上，要么是结合在微球上，最后是细胞离心后，都不会结合上的。

一席繁荒

niwanmao 发表于 2020-5-6 08:16
CD3不会发生内吞的，只有CD4出现，这是反复证实了。
所以你得从设门上找原因，或者抗体标记上找原因。 ...

倪老师您好，请问为什么CD4分子会发生内吞而CD3分子不会发生内吞，如果是因为影响钙离子水平而通过钙调蛋白引起的内吞，但这样是不是也会引起CD3内吞，倪老师有没有相关CD3不会内吞的文献分享一下，谢谢倪老师。

niwanmao

一席繁荒 发表于 2021-4-21 08:45
倪老师您好，请问为什么CD4分子会发生内吞而CD3分子不会发生内吞，如果是因为影响钙离子水平而通过钙调蛋 ...

暂时没看到相关的文献。

半年y

倪老师您好，我做胞内指标  PMA刺激后也会产生CD3分子分群不清楚甚至不分群啊。

niwanmao

半年y 发表于 2021-5-3 23:49
倪老师您好，我做胞内指标  PMA刺激后也会产生CD3分子分群不清楚甚至不分群啊。 ...

会影响一点，主要是非特异性荧光增强引起，但不会分不开。
如果分不开的话，得注意是不抗体用量不正确，需进行一下抗体用量的滴定。

shunlifasci

niwanmao 发表于 2021-5-4 08:36
会影响一点，主要是非特异性荧光增强引起，但不会分不开。
如果分不开的话，得注意是不抗体用量不正确， ...

最近我做了好几次不同细胞的刺激实验，以提问者的问题为例，我觉得刺激后CD3分群不清楚比较正常。。因为刺激后的细胞胞体大小、形态改变，细胞寿命也改变，甚至有的是那种活化后“要死不死”的细胞，所以阴阳群分界不清可以理解。我的体会是，凡是刺激后的细胞实验，上机时候都做个FMO对照，这样才有助于细胞分群。