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[凋亡检测] 只有直方图和散点图,怎么统计凋亡率?

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 楼主| 发表于 2021-2-8 11:08:33 | 显示全部楼层 |阅读模式
15流星
老师您好,直方图和散点图是课题组之前的人留下来的,原始数据丢失,现在也联系不到人,老师不希望数据浪费掉,所以想做一些补救,还请您不吝赐教。
问题:
1.图片是否是已经圈门之后的图?(因为看到散点图的横坐标是前向散射光,纵坐标是荧光值,这是否是对经过FSC和SSC圈选之后的细胞群的二次分析?)

2. 老师说希望根据散点图的密度来做一个大致的定量分析,看一看细胞凋亡的情况,老师说荧光染的肯定是凋亡,但具体没说,让我先找找有没有这样的技术?如果不能定量,定性是否可以呢?图片中细胞群的FSC值和荧光值的变化还是很明星的,这该怎么描述呢?

3. 看到网站上的《入门必看-流式细胞术原理与应用》PDF文档中,关于直方图可以算面积,如果我这图的直方图也算面积,是不是代表该荧光标记的细胞数量呢?如果荧光标记的是凋亡标志,数量的变化是否可以反应细胞凋亡的变化?

(ps.上传的附件是PNG格式,可能不太清晰,但是原始图片是tif格式的,很清晰。《入门必看-流式细胞术原理与应用》中有以PI染色的DNA为纵坐标FSC为横坐标的图,图注中说这样的图会有大量重叠,但是我们的图,FSC为横坐标,荧光为纵坐标,却几乎没有明显的重叠,这可以说明在我们的数据中FSC足以将细胞区分开吗?如果可以,能不能根据对照组划十字线,区分正常细胞和凋亡细胞呢?)

Fig1-散点图

Fig1-散点图

Fig1-直方图

Fig1-直方图

Fig2-散点图

Fig2-散点图

Fig2-直方图

Fig2-直方图

Fig3-散点图

Fig3-散点图

Fig3-直方图

Fig3-直方图
发表于 2021-2-8 13:26:34 | 显示全部楼层
要分析,还是得找FCS文件。

从你这里提供的图看,可能是用Annexin V 染色测凋亡的,这样的染色测凋亡是不准确的,所以还是建议重复,用Annexin V FITC+PI双染做。
 楼主| 发表于 2021-2-8 15:11:57 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-2-8 13:26
要分析,还是得找FCS文件。

从你这里提供的图看,可能是用Annexin V 染色测凋亡的,这样的染色测凋亡是不 ...

谢谢倪老师,现在问题是这样的,实验后面会重新做更完善的,只是希望在这批数据里面找到一些有用的东西,不然就都浪费掉了,就只分析已有的信息可以吗?
发表于 2021-2-9 08:28:53 | 显示全部楼层
yaya666 发表于 2021-2-8 15:11
谢谢倪老师,现在问题是这样的,实验后面会重新做更完善的,只是希望在这批数据里面找到一些有用的东西, ...

浪费不浪费,其实主要看数据是否有效,这里的检测方法已经无效了,你再在里面挖掘,反而是对精力和时间的浪费。
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