小鼠MC38皮下瘤免疫微环境中CD4/CD8比例异常

tiger

Reyna 发表于 2021-3-10 15:16
好的，谢谢倪老师

从图上看CD3强性CD4细胞大部分是坏死细胞。另外死活染料荧光太强，无法补偿，也可能导致CD3强阳性细胞丢失。

Reyna

tiger 发表于 2021-3-10 16:24
从图上看CD3强性CD4细胞大部分是坏死细胞。另外死活染料荧光太强，无法补偿，也可能导致CD3强阳性细胞丢 ...

那老师，这个该怎么调整呢？是需要换死活燃料还是说CD3抗体

niwanmao

Reyna 发表于 2021-3-10 17:33
那老师，这个该怎么调整呢？是需要换死活燃料还是说CD3抗体

你能否将CD45+部分的所有荧光通道组合散点图显示出来看看，再决定是否换抗体。我总觉得信号不应该会丢失。

tiger

niwanmao 发表于 2021-3-11 07:56
你能否将CD45+部分的所有荧光通道组合散点图显示出来看看，再决定是否换抗体。我总觉得信号不应该会丢失 ...

去除坏死细胞后，那群CD3强阳性细胞就不见了

niwanmao

tiger 发表于 2021-3-11 09:35
去除坏死细胞后，那群CD3强阳性细胞就不见了

是的，CD3强阳性这些信号可以肯定是死细胞，因为可以看到其SSC也很大，不是淋巴细胞区域，各通道均呈现出明显的非特异染色。

我只是觉得，@Reyna  做的CD3分群不够开，所以CD3弱表达那个区域，可能就是辅助T被漏掉的区域。

Reyna

niwanmao 发表于 2021-3-11 07:56
你能否将CD45+部分的所有荧光通道组合散点图显示出来看看，再决定是否换抗体。我总觉得信号不应该会丢失 ...

倪老师，您的意思是说我以横坐标为CD45，然后纵坐标是其他各个通道图做散点图还是说是在CD45阳性的上级门下把各个抗体两两组合显示呀

Reyna

tiger 发表于 2021-3-11 08:53
不是换CD3抗体，是降低死活染料用量或调低电压，使荧光信号可见。

好的，老师我懂您的意思了，是说我的死活染料太强了，所以让我的CD3的荧光信号不可见，那我调低电压试试