FC Block和抗体可以一起混合后染色吗？

niwanmao

alc 发表于 2021-3-12 13:14
那如果是先封闭，不洗涤对结果影响大吗？目前做的实验还没有发现block的特别的效果 ...

必须洗涤。如果发现阻断无效果，两种可能性：
1、阻断剂本身效果问题。
2、靶细胞因Fc段导致的非特异性结合水平本身就低。

alc

niwanmao 发表于 2021-3-12 13:55
必须洗涤。如果发现阻断无效果，两种可能性：
1、阻断剂本身效果问题。
2、靶细胞因Fc段导致的非特异性结 ...

好的，谢谢倪老师，以后做实验会注意的

五味瓶JJJ

niwanmao 发表于 2021-3-9 19:38
需先进行Fc Block之后，洗涤，再进行抗体染色。

老师，为什么要先封闭再染色，混染和先染色再封闭这几种染色方法有什么区别吗？对实验影响大吗？可能会造成哪些影响

五味瓶JJJ

五味瓶JJJ 发表于 2021-5-8 23:50
老师，为什么要先封闭再染色，混染和先染色再封闭这几种染色方法有什么区别吗？对实验影响大吗？可能会造 ...

还有为什么封闭后一定要洗掉呢？

niwanmao

五味瓶JJJ 发表于 2021-5-8 23:50
老师，为什么要先封闭再染色，混染和先染色再封闭这几种染色方法有什么区别吗？对实验影响大吗？可能会造 ...

就像抗体染色结束后，是否需要洗涤，一样的道理。不洗，也能染出来，但是你可以明显看到非特异性背景会增高，因为会有游离抗体在干扰。

封闭后，不洗涤，可能也能做出来，但阻断剂也是蛋白，异质游离蛋白，多少会对抗体染色会有影响，所以一般还是建议不要吝惜洗涤这一步，花不了几分钟。

shunlifasci

niwanmao 发表于 2021-5-10 08:25
就像抗体染色结束后，是否需要洗涤，一样的道理。不洗，也能染出来，但是你可以明显看到非特异性背景会增 ...

倪老师，我们实验室一直的做法是先封闭染色10min，然后继续染其他抗体。我也查了说明书，说明书里写的“It is not necessary to wash cells between these blocking and immunostaining steps.”Human TruStain FcXTM (Fc Receptor Blocking Solution，货号：422301 )
所以我觉得好像不是必须要封闭后洗涤。

不喵的MEOW

想问一下大家，有没有Fc Block推荐呀？

overcome1996

不喵的MEOW 发表于 2022-2-10 16:01
想问一下大家，有没有Fc Block推荐呀？

同问，BD的挺贵

Yuck

alc 发表于 2021-3-12 13:14
那如果是先封闭，不洗涤对结果影响大吗？目前做的实验还没有发现block的特别的效果 ...

差别应该不大，在官网上专门找了下说明书。以前我们也是封闭洗涤，去年半年就封闭不洗了，没看出有什么差别。

wmj123456

niwanmao 发表于 2021-3-10 15:04
不太好评价。因为我们也用的很少，平时主要做临床样本，在临床检测中我们曾用过一款进口的Fc Block，用和 ...

倪老师，请教下，如果是全血样本，在哪一步使用Fc受体封闭？因为全血样本通常是先表染，再裂红，而Fc受体是需要用在抗体染色之前，那在哪一步Fc受体封闭好一些呢？