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楼主: alc

[功能检测] FC Block和抗体可以一起混合后染色吗?

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发表于 2021-3-12 13:55:26 | 显示全部楼层
alc 发表于 2021-3-12 13:14
那如果是先封闭,不洗涤对结果影响大吗?目前做的实验还没有发现block的特别的效果 ...

必须洗涤。如果发现阻断无效果,两种可能性:
1、阻断剂本身效果问题。
2、靶细胞因Fc段导致的非特异性结合水平本身就低。

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 楼主| 发表于 2021-3-12 14:55:37 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-3-12 13:55
必须洗涤。如果发现阻断无效果,两种可能性:
1、阻断剂本身效果问题。
2、靶细胞因Fc段导致的非特异性结 ...

好的,谢谢倪老师,以后做实验会注意的
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发表于 2021-5-8 23:50:14 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-3-9 19:38
需先进行Fc Block之后,洗涤,再进行抗体染色。

老师,为什么要先封闭再染色,混染和先染色再封闭这几种染色方法有什么区别吗?对实验影响大吗?可能会造成哪些影响
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发表于 2021-5-9 23:04:09 来自手机 | 显示全部楼层
五味瓶JJJ 发表于 2021-5-8 23:50
老师,为什么要先封闭再染色,混染和先染色再封闭这几种染色方法有什么区别吗?对实验影响大吗?可能会造 ...

还有为什么封闭后一定要洗掉呢?
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发表于 2021-5-10 08:25:14 | 显示全部楼层
五味瓶JJJ 发表于 2021-5-8 23:50
老师,为什么要先封闭再染色,混染和先染色再封闭这几种染色方法有什么区别吗?对实验影响大吗?可能会造 ...

就像抗体染色结束后,是否需要洗涤,一样的道理。不洗,也能染出来,但是你可以明显看到非特异性背景会增高,因为会有游离抗体在干扰。

封闭后,不洗涤,可能也能做出来,但阻断剂也是蛋白,异质游离蛋白,多少会对抗体染色会有影响,所以一般还是建议不要吝惜洗涤这一步,花不了几分钟。
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发表于 2021-5-18 21:11:28 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-5-10 08:25
就像抗体染色结束后,是否需要洗涤,一样的道理。不洗,也能染出来,但是你可以明显看到非特异性背景会增 ...

倪老师,我们实验室一直的做法是先封闭染色10min,然后继续染其他抗体。我也查了说明书,说明书里写的“It is not necessary to wash cells between these blocking and immunostaining steps.”Human TruStain FcXTM (Fc Receptor Blocking Solution,货号:422301 )
所以我觉得好像不是必须要封闭后洗涤。
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发表于 2022-2-10 16:01:33 | 显示全部楼层
想问一下大家,有没有Fc Block推荐呀?
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发表于 2022-2-14 11:29:51 | 显示全部楼层
不喵的MEOW 发表于 2022-2-10 16:01
想问一下大家,有没有Fc Block推荐呀?

同问,BD的挺贵
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发表于 2022-2-14 13:17:09 | 显示全部楼层
alc 发表于 2021-3-12 13:14
那如果是先封闭,不洗涤对结果影响大吗?目前做的实验还没有发现block的特别的效果 ...

差别应该不大,在官网上专门找了下说明书。以前我们也是封闭洗涤,去年半年就封闭不洗了,没看出有什么差别。
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发表于 2023-3-4 21:15:41 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-3-10 15:04
不太好评价。因为我们也用的很少,平时主要做临床样本,在临床检测中我们曾用过一款进口的Fc Block,用和 ...

倪老师,请教下,如果是全血样本,在哪一步使用Fc受体封闭?因为全血样本通常是先表染,再裂红,而Fc受体是需要用在抗体染色之前,那在哪一步Fc受体封闭好一些呢?
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