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[淋巴细胞相关] 病人PBMC中CD4分选(阴选)

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 楼主| 发表于 2021-10-13 10:08:46 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
请问大家有没有做过从病人PBMC中分选CD4呢?不知道为什么每次分出来的CD4少得可怜,一个48孔都铺不满。随后用beads刺激也无法活化,跑流式甚至发现无法染上抗体,感觉是细胞都死掉了。愁死了,也有把不同病人的PBMC混在一起提,但还是很少,且刺激不起来。有没有人有类似的经历以及是怎么解决的呢?谢谢!

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发表于 2021-10-13 11:12:40 | 显示全部楼层
分选前的PBMC细胞量如何?
用的是磁珠还是流式分选?
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发表于 2021-10-14 10:58:49 | 显示全部楼层
不同人的PBMC混在一起可能会有一些相互杀的问题存在吧
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发表于 2021-10-14 15:04:01 | 显示全部楼层
或者免疫系统已经崩了,可以用正常人的试试。
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 楼主| 发表于 2021-10-14 16:54:44 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2021-10-13 11:12
分选前的PBMC细胞量如何?
用的是磁珠还是流式分选?

分选前PBMC一管10的7次方,-80冻过后会有聚团,吹不散。所以量肯定少了很多,因此才会选择不同人的PBMC混在一起分。用的是磁珠分选,阴选法。
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 楼主| 发表于 2021-10-14 16:55:49 | 显示全部楼层
lililil 发表于 2021-10-14 10:58
不同人的PBMC混在一起可能会有一些相互杀的问题存在吧

理论上这样做应该不可以,但是一个病人只有一管PBMC,觉得最后的量太少了,做不了实验,才会这样做
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 楼主| 发表于 2021-10-14 16:56:32 | 显示全部楼层
司徒随风 发表于 2021-10-14 15:04
或者免疫系统已经崩了,可以用正常人的试试。

正常人的T细胞分出来状态不错,镜下很亮
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发表于 2021-10-14 18:16:46 | 显示全部楼层
老鼠人变细胞人 发表于 2021-10-14 16:54
分选前PBMC一管10的7次方,-80冻过后会有聚团,吹不散。所以量肯定少了很多,因此才会选择不同人的PBMC混 ...

为何不直接分选,而是-80度冻过后分选? -80度冻存是对细胞活力影响很大的,所以分选不出细胞的原因就在这里。
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发表于 2021-10-15 08:56:07 | 显示全部楼层
因为没有说具体的分选过程,所以不知道楼主分选一次用了多长时间,分选时细胞处于什么样的环境下。我师妹之前分选B细胞的时候,因为贪多,分选耗时太长,并且没有在冰上操作,导致绝大部分细胞死掉了。后来修改了实验方案,将所有操作都在冰上进行,缓冲液、培养基也都是在冰上保存,并且缩短分选时间(从杀老鼠到将细胞放到培养箱)到3个小时之内,效果好了很多。

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