小鼠血液裂红后白细胞分群及单核抗体选择

三三两两小星星

niwanmao 发表于 2022-3-19 11:21
做实验，最不好的习惯，就是加了哪些抗体却不在流式获取时标明，这对于以后发文章时原始数据提供审核，会 ...

唉实在是不好意思，之前学习的时候没有养成好习惯，我自己整理这次结果的时候也发现了这个问题，软件只会读取原始保存名，下次一定注意完整标注
谢谢老师的提醒

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ang1994 发表于 2022-3-21 15:55
老师，您好，我想问下你这是什么小鼠外周血裂红的，用的哪家裂红液啊？我们裂红后，粒细胞那群完全的看不 ...

我买的碧云天成品，是FVB背景的基因鼠，C57做过也差不多

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记录一下，腹腔标记用F4/80暂时没什么问题，血液单核试了CD115-PE，但是和FITC通道窜色有点厉害，所以这次尝试了看有的帖子用的F4/80+CD11b+标记，F4/80-FITC，CD11b-cy5.5。本来挺困扰这个单核细胞数量少，和粒细胞混在一起了（不知道这样是不是能用的），不知道怎么划出双阳的十字设门，今天正好看到公众号的推送，才发现自己太轴了，应该一步一步来圈标记。现在就是不知道自己这样圈是不是对的，圈出来的对照组2例（9.10号）和实验组3例（6.7.8号）这个算不算有差异？欢迎大家指点。

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附两张图片

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这次原始文件改了以前不命名的坏习惯，如果大家有什么经验也欢迎讨论

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默默记录一下，这次不知道为什么CD11b没染上，圈出的单核几乎没有占比。有个疑惑就是，小鼠的粒细胞和单核细胞群是经常混在一起吗？100-300微升的眼眶取血是否够看到分群呢？
一直在怀疑是不是自己的细胞量太少，导致单核细胞表现得不明显，特别是双染需要分出空白和单染管。下次打算把多几个样本混合一下。

niwanmao

三三两两小星星 发表于 2022-8-11 18:35
默默记录一下，这次不知道为什么CD11b没染上，圈出的单核几乎没有占比。有个疑惑就是，小鼠的粒细胞和单核 ...

一般都是操作问题，这个量是没有问题的。

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niwanmao 发表于 2022-8-11 21:07
一般都是操作问题，这个量是没有问题的。

谢谢老师回复，因为自己重复了很多次都是只有两群，估计是某些固定的操作影响的，可以请问下老师具体哪些操作要注意吗？我有听说重悬细胞的时候建议手弹而不是用枪头吹打。

niwanmao

三三两两小星星 发表于 2022-8-12 17:55
谢谢老师回复，因为自己重复了很多次都是只有两群，估计是某些固定的操作影响的，可以请问下老师具体哪些 ...

这不是最关键的。操作大多是细节，不看到你操作很难说清楚准确原因。

可以先拿那些分群明显的标记，练练手，都稳定了之后，再做难做的标记。

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niwanmao 发表于 2022-8-13 10:05
这不是最关键的。操作大多是细节，不看到你操作很难说清楚准确原因。

可以先拿那些分群明显的标记，练练 ...

谢谢老师回复。其实我只是想标记出单核细胞，一开始用了CD115和CD11b效果不好，听了另一个老师的建议才用F4/80和CD11b