请教冻存细胞复苏步骤 用于流式

niwanmao

chujindong 发表于 2011-8-29 20:38

                               
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不知道有没有相关文献。我想可以试试，做个小实验看看。
另一个问题：如果单纯做免疫表型的流式，不牵涉 ...

没有文献，只是我根据经验推理，但我认为是行的通的。
FICOLL的毒性大家都知道，经过这类毒性物质处理过，细胞的活性多少会受到影响。

如果做流式的免疫表型，跟细胞状态也是关系比较大的，你有没有注意到死细胞的染色，细胞一旦死亡，其膜表面的结合位点经常会发生改变，要么瞎结合，要么什么都不结合（一般是以瞎结合多见），这时，你就会看到所有的标记都是阳性的或者都是阴性的。

chujindong

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原来如此。但是冻存过的细胞难免会死一部分，这个很难避免，也不好排除，如果考虑这个的话，那么测出来的数据应该是不准确的了。但不知道这个影响能有多大？我查到一些文献，有用冻存的PBMC来做流式的，而且这样的文章也挺多，其中不乏一些高分文章，说明审稿人还是认同这个方法的。

niwanmao

chujindong 发表于 2011-8-29 22:10

                               
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原来如此。但是冻存过的细胞难免会死一部分，这个很难避免，也不好排除，如果考虑这 ...

这需要预先通过设门排除死细胞。其实很多完善一点的文章里面都会放上这种图的。
粗糙一点的就是通过FSC/SSC散点图，好一点的就通过活性染料排除（例如Hoechst 33258、PI等）

summer-suk

倪老师  我用的天津TBD的淋巴细胞分离液分离的PBMC 想冻存后再做流式 主要测Th1/2/17还有treg 想知道这样的话影响大吗 谢谢老师 麻烦看到回复下呢

niwanmao

summer-suk 发表于 2018-11-21 02:38
倪老师  我用的天津TBD的淋巴细胞分离液分离的PBMC 想冻存后再做流式 主要测Th1/2/17还有treg 想知道这样的 ...

有不少人都这么做，问题不大，但关键在于提取的时候，尽量不要丢细胞。

summer-suk

niwanmao 发表于 2018-11-22 08:48
有不少人都这么做，问题不大，但关键在于提取的时候，尽量不要丢细胞。 ...

好的 谢谢老师 打算用新赛美的无血清细胞冻存液冻存一段时间复苏再做了试试 谢谢老师