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[凋亡检测] 补偿调节和细胞圈门

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 楼主| 发表于 2022-6-9 14:32:14 | 显示全部楼层 |阅读模式
1流星
老师你好,这是我从仔鸡的肝脏提出的细胞,做的FITC/PI凋亡检测,细胞圈门见图1,图2分别是单染和双染调节补偿后的图,请问老师,这个补偿还需要更改吗?因为采用这个补偿调节,有几个样本图片很怪(图3)。麻烦老师解答!

图1

图1

图2

图2

图3

图3
组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
发表于 2022-6-9 14:40:18 | 显示全部楼层
补偿值是多少?
看图3里面Annexin V FITC都没什么阳性。染色上面是否有问题?
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 楼主| 发表于 2022-6-9 15:16:49 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-6-9 14:40
补偿值是多少?
看图3里面Annexin V FITC都没什么阳性。染色上面是否有问题? ...

老师您好,补偿值如图,FITC 16.3537/PI 0.2686。染色方面应该没有问题,是严格按照试剂盒上进行的,使用的试剂盒是美仑的。有一些样本的FITC是有阳性的,所以有考虑过是不是补偿调节的问题。

补偿值

补偿值

其他样本

其他样本
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发表于 2022-6-9 20:41:29 | 显示全部楼层
17702348577 发表于 2022-6-9 15:16
老师您好,补偿值如图,FITC 16.3537/PI 0.2686。染色方面应该没有问题,是严格按照试剂盒上进行的,使用 ...

这种阳性看着也不对劲。
双阴性区域没有,如果左上那部分算双阴,说明图形完全扭曲了。如果确实没有双阴性的活细胞,那么就说明细胞活力确实不行了。

是否在染色前看过细胞在显微镜下的形态?
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 楼主| 发表于 2022-6-10 00:03:55 | 显示全部楼层
染色之前没有看过形态,只是大概数了一下细胞数量,请问老师,现在还有办法调整补救一下吗。
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发表于 2022-6-12 09:39:45 | 显示全部楼层
17702348577 发表于 2022-6-10 00:03
染色之前没有看过形态,只是大概数了一下细胞数量,请问老师,现在还有办法调整补救一下吗。 ...

目前不太好说,最好把FCS文件传上来看看。
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 楼主| 发表于 4 天前 | 显示全部楼层
fsc文件没有找到上传链接
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 楼主| 发表于 4 天前 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2022-6-12 09:39
目前不太好说,最好把FCS文件传上来看看。

找到上传办法了,麻烦倪老师帮忙看一下!

D1-G.zip

9.24 MB, 下载次数: 6

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发表于 3 天前 | 显示全部楼层
17702348577 发表于 2022-6-21 18:01
找到上传办法了,麻烦倪老师帮忙看一下!

首先,按如下补偿调好:
2022-06-22_133638.png


其次,PI的通道建议用PerCP-cy5.5,分得会更好,最后D组的结果见下图,其它组按类似的方法分析:
D1-G&D2-G&D3-G&D4-G&D5-G.pdf (143.16 KB, 下载次数: 5)

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