检测Treg时CD25的表达强度

yuyu9073 · 发表于 2014-10-13 09:51:07

请教各路大侠，本人用ebioscience家测CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞，但是发CD25的值都不高（有的时候还不到1%），以致最后Treg的值也低，所以想听听大伙的意见，是样本处理过程需要注意什么细节吗？还是有什么办法提高CD25的值呢？谢谢

niwanmao · 发表于 2014-10-13 12:28:28

CD25的荧光是分的不太好，不过在CD25和foxP3的分群上还是可以圈的（如下图）：

yuyu9073 · 发表于 2014-10-14 08:04:29

谢谢，倪老师

xjwl8587 · 发表于 2014-10-24 18:39:03

不知道你用的什么标本，如果你用的是PBMCs而且是刚复苏的PBMCs我建议overnight rest PBMCs。CD25是IL-2 receptor，如果你的PBMCs是经过frozen and thawed那在这个过程中会影响IL-2 receptor的cycling。CD25除了是Treg的标志，其实他更是activation marker，经过resting过后的PBMCs能过recovery the expression of activation marker on lymphocytes.你可以试一试，应该经过resting过后的群体更加漂亮

钢蛋儿 · 发表于 2014-10-25 23:44:35

niwanmao 发表于 2014-10-13 12:28
CD25的荧光是分的不太好，不过在CD25和foxP3的分群上还是可以圈的（如下图）：

...

太漂亮的图……

yuyu9073 · 发表于 2014-10-27 11:24:42

xjwl8587 发表于 2014-10-24 18:39
不知道你用的什么标本，如果你用的是PBMCs而且是刚复苏的PBMCs我建议overnight rest PBMCs。CD25是IL-2 rec ...

你好，我是用当天新鲜的血液分离出来的PBMCS，后面就接着标志与破膜这些步骤了。看了您的建议，是指没标的细胞先放过夜再进行标志等吗？还是破膜这些完成后再放过夜呢？新手呀，这些还是不懂，望指教

xjwl8587 · 发表于 2014-10-28 06:25:45

yuyu9073 发表于 2014-10-27 11:24
你好，我是用当天新鲜的血液分离出来的PBMCS，后面就接着标志与破膜这些步骤了。看了您的建议，是指没标 ...

您好不知道您有没有您之前做的流式图？能否p上来一张，我想看一下你直接用fresh的PBMCs是什么样的结果。我们实验室之前也有这样的问题，所以我想确认一下。还有就是看一下你的Foxp3的staining是否也有我们用的fresh的PBMCs staining时一样的情况。

yuyu9073 · 发表于 2014-10-29 08:35:23

xjwl8587 发表于 2014-10-28 06:25
您好不知道您有没有您之前做的流式图？能否p上来一张，我想看一下你直接用fresh的PBMCs是什么样的结果 ...

求助：Treg结果是否正确
http://www.flowcyto.cn/bbs/thread-3865-1-1.html
(出处: 流式中文网)

yuyu9073 · 发表于 2014-10-29 08:36:02

xjwl8587 发表于 2014-10-28 06:25
您好不知道您有没有您之前做的流式图？能否p上来一张，我想看一下你直接用fresh的PBMCs是什么样的结果 ...

那是我原先做的图，您看下，都是用当天分离的淋巴细胞做的

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