小鼠Th1 Th17细胞比例异常，求指导

zhudamao

我染的小鼠Th1 Th17的比例跟文献的差异太大，求各位大神指点，附上结果

niwanmao

1、前面的设门是如何设的？
2、抗体组合和荧光搭配是怎么样的？

从图形看，像是没有染上去，不排除破膜问题

zhudamao

niwanmao 发表于 2018-8-30 08:36
1、前面的设门是如何设的？
2、抗体组合和荧光搭配是怎么样的？

老师您好
1. 门是根据空白管设定的
2. il-17的荧光是BV421   IFN-γ是PE-CY7

niwanmao

zhudamao 发表于 2018-8-31 09:52
老师您好
1. 门是根据空白管设定的
2. il-17的荧光是BV421   IFN-γ是PE-CY7

1、门应该是根据FMO管设置才对。
2、我的意思是，除了IL-17和IFN-g以外，其它的荧光素搭配。目前看来，应该还是没破膜成功。

mybiosciences

有没有加死细胞排除试剂？
这类实验一个加上这样的试剂的

zhudamao

mybiosciences 发表于 2018-9-5 21:58
有没有加死细胞排除试剂？
这类实验一个加上这样的试剂的

没有加，因为是脾脏

zhudamao

niwanmao 发表于 2018-9-1 07:48
1、门应该是根据FMO管设置才对。
2、我的意思是，除了IL-17和IFN-g以外，其它的荧光素搭配。目前看来，应 ...

CD3 BV510       CD4 FITC     IFN PE-CY7     IL17 BV421    IL4 APC

zhudamao

niwanmao 发表于 2018-9-1 07:48
1、门应该是根据FMO管设置才对。
2、我的意思是，除了IL-17和IFN-g以外，其它的荧光素搭配。目前看来，应 ...

试剂商建议我刺激8小时，老师您觉得有必要吗？

zhudamao

niwanmao 发表于 2018-9-1 07:48
1、门应该是根据FMO管设置才对。
2、我的意思是，除了IL-17和IFN-g以外，其它的荧光素搭配。目前看来，应 ...

另外老师，刺激4小时跟6小时区别大吗？

niwanmao

zhudamao 发表于 2018-9-6 16:16
另外老师，刺激4小时跟6小时区别大吗？

时间不同，效果会有差别，但不会一点都没有。我觉得你先从破膜操作上面找问题。