小鼠Th1 Th17细胞比例异常，求指导

mybiosciences · 发表于 2018-9-8 22:57:04

zhudamao 发表于 2018-9-6 16:15
试剂商建议我刺激8小时，老师您觉得有必要吗？

你用什么刺激物刺激的？
如果是蛋白刺激，需要刺激24h（提前6h加入阻断剂）

mybiosciences · 发表于 2018-9-8 23:00:04

zhudamao 发表于 2018-9-6 16:14
CD3 BV510 CD4 FITC IFN PE-CY7 IL17 BV421 IL4 APC

建议吧CD3颜色换掉，比如用percp-cy5.5/percp，bv510与与bv421之间补偿比较大
另外IL-4是最弱的，跟il-17换一下颜色最好了

mybiosciences · 发表于 2018-9-8 23:01:40

zhudamao 发表于 2018-9-6 16:12
没有加，因为是脾脏

培养会产生大量的死细胞，一定要加死细胞排除试剂，比如BD的FVS系列染料和invitrogen的live/dead染料，否则会有很多非特异性染色

mybiosciences · 发表于 2018-9-8 23:03:38

另外，小鼠细胞染色之前一定要加CD16/CD32 FcR阻断剂阻断，否则染色会出问题。

zhudamao · 发表于 2018-9-10 14:43:54

mybiosciences 发表于 2018-9-8 23:03
另外，小鼠细胞染色之前一定要加CD16/CD32 FcR阻断剂阻断，否则染色会出问题。 ...

感谢建议，抗体已经买了一段时间了，不知道能不能马上换荧光

zhudamao · 发表于 2018-9-10 14:46:18

mybiosciences 发表于 2018-9-8 22:57
你用什么刺激物刺激的？
如果是蛋白刺激，需要刺激24h（提前6h加入阻断剂） ...

我用的是BD的刺激阻断合剂，货号550583 含有PMA 离子霉素 BFA

zhudamao · 发表于 2018-9-10 15:57:12

niwanmao 发表于 2018-8-30 08:36
1、前面的设门是如何设的？
2、抗体组合和荧光搭配是怎么样的？

老师您好，我这次延长了破膜时间，但是感觉效果一般，会不会是我的抗体加少了，我的CD3 CD4按照试剂商推荐的量加，试剂商用的1/4的量，各是0.5μL

zhudamao · 发表于 2018-9-10 16:47:01

本帖最后由 zhudamao 于 2018-9-10 16:50 编辑

各位老师，这是我最近的实验，1是空白，2-4是多标，请各位老师指导

zhudamao · 发表于 2018-9-10 16:50:50

本帖最后由 zhudamao 于 2018-9-10 16:53 编辑

样本 3 ，4

zhudamao · 发表于 2018-9-11 06:43:24

zhudamao 发表于 2018-9-10 15:57
老师您好，我这次延长了破膜时间，但是感觉效果一般，会不会是我的抗体加少了，我的CD3 CD4按照试剂商推 ...

il17 ifn 抗体各加了1微升

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