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楼主: 瓜瓜999

[结构和原理] CCR2没有表达?

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发表于 2024-6-12 13:06:17 | 显示全部楼层
附带了pdf文件,以供参考

常见荧光素的强弱排行.pdf

10.87 MB, 下载次数: 11

组织样本处理不好?流式中文网原研的魔滤®魔杵®套装,低成本解决,高质量收获
 楼主| 发表于 2024-6-20 22:29:48 | 显示全部楼层
麦小光 发表于 2024-6-12 13:04
对的,中低表达的蛋白,配合低效价的抗体,再整上低亮度的荧光素,基本上就是一个大写的GG,流式配色不能 ...

非常感谢,刚开始我们还找BD公司的人帮我们看了一下gating strategy,还有流式配色。BD说没啥问题我们才用的,看来踩雷了╥﹏╥...
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 楼主| 发表于 2024-6-20 22:32:15 | 显示全部楼层
Fusca 发表于 2024-6-11 21:11
对的,因为我们要分选CCR2+/-单核,专门测试过各家的抗体,这家的真的染不出来单核,我推荐的那几个起码我 ...

非常感谢😃 正好我们都有这些抗体,之后试一下。当时还让BD帮我们看了我们设计的,没想到踩雷了😣
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 楼主| 发表于 2024-6-22 03:16:22 | 显示全部楼层
Fusca 发表于 2024-6-11 21:11
对的,因为我们要分选CCR2+/-单核,专门测试过各家的抗体,这家的真的染不出来单核,我推荐的那几个起码我 ...

关于CCR2,FACS Diva里的detector是V810,fluorochrome是BV785。我查了一下BV758表现出a medium level of brightness。
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 楼主| 发表于 2024-7-31 19:00:47 | 显示全部楼层
Fusca 发表于 2024-6-11 11:58
CCR2染不出来很多情况下都是因为抗体不行和强度不够。小鼠的CCR2抗体最推荐用R&D的,但是要注意效期,此外 ...

请问intubation的温度,你们是4度?室温?还是37度?
我之前一直是4度。最近发现CCR2好像要37度。https://www.rndsystems.com/blog/ ... eceptors-live-cells
我问了biolegend他们建议室温或者37。
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发表于 2024-8-23 18:47:25 | 显示全部楼层
瓜瓜999 发表于 2024-7-31 19:00
请问intubation的温度,你们是4度?室温?还是37度?
我之前一直是4度。最近发现CCR2好像要37度。https:/ ...

我们一直都是用的4度孵育,不过是用的R&D的抗体。
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 楼主| 发表于 2024-11-29 03:58:19 | 显示全部楼层
本帖最后由 瓜瓜999 于 2024-11-29 04:02 编辑

最近做了血液的流式,结果发现几乎没有CCR2细胞

blood gating strategy

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 楼主| 发表于 2024-11-29 04:04:36 | 显示全部楼层
本帖最后由 瓜瓜999 于 2024-11-29 04:07 编辑
Fusca 发表于 2024-6-11 21:11
对的,因为我们要分选CCR2+/-单核,专门测试过各家的抗体,这家的真的染不出来单核,我推荐的那几个起码我 ...

最近做了血液的流式,发现Ly6c+细胞里的CCR2几乎没有,说明这个抗体不行吗?

blood_gating strategy

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发表于 2024-11-29 09:05:35 | 显示全部楼层
瓜瓜999 发表于 2024-11-29 04:04
最近做了血液的流式,发现Ly6c+细胞里的CCR2几乎没有,说明这个抗体不行吗? ...

有没有试过用LPS刺激后再检测,或可作为阳性对照?
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 楼主| 发表于 2024-11-30 06:34:46 | 显示全部楼层
niwanmao 发表于 2024-11-29 09:05
有没有试过用LPS刺激后再检测,或可作为阳性对照?

没有试过,直接染色固定。
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