细胞周期检测应该用哪种RNase？

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-4-6 08:12

                               
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没有做两组对比，但是相同条件的细胞，同时做凋亡和周期，凋亡收集特快，周期收集就慢得不得了，不知道是 ...

AV-PI和细胞周期两组不能对比的，因为细胞周期这组处理步骤不同，有可能是你在固定时出了问题，导致细胞大量死亡呢？你说是吧。
一般RNAse把RNA分解掉，会使结果更准确地反映DNA含量。但不会使细胞收集不到。

蓝白小熊

niwanmao 发表于 2012-4-6 08:16

                               
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AV-PI和细胞周期两组不能对比的，因为细胞周期这组处理步骤不同，有可能是你在固定时出了问题，导致细胞 ...

老师，我就一直在想你说的这个固定问题，因为我看到你在所有帖子中都在强调加乙醇时应该边加边振荡，但我就不知道该怎么振荡，因为我一般是3000rpm离心5min后，弃上清，往Ep管中加入1ml乙醇，用枪头轻轻吹打，然后放-20°，怎么也做不到边加边振荡啊

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-4-6 08:23

                               
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老师，我就一直在想你说的这个固定问题，因为我看到你在所有帖子中都在强调加乙醇时应该边加边振荡，但我 ...

我用鼠标给你画了个细胞周期标本固定操作示意图，你看看是否能够理解？

细胞周期标本固定操作示意图

stef1981

niwanmao 发表于 2012-4-6 08:40

                               
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我用鼠标给你画了个细胞周期标本固定操作示意图，你看看是否能够理解？

不错，画得挺好

niwanmao

stef1981 发表于 2012-4-6 08:45

                               
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不错，画得挺好

看到你这个，蓦然醒悟，这个帖子跑题了，从RNAse跑到固定操作了。呵呵。

stef1981

niwanmao 发表于 2012-4-6 09:03

                               
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看到你这个，蓦然醒悟，这个帖子跑题了，从RNAse跑到固定操作了。呵呵。

呵呵，都是相关的，每一步都很重要

蓝白小熊

niwanmao 发表于 2012-4-6 08:40

                               
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我用鼠标给你画了个细胞周期标本固定操作示意图，你看看是否能够理解？

老师，你好牛哦，佩服佩服。我之前也有想过用震荡仪，不过BD老师叫我操作一定要轻柔，以免损伤细胞造成假阳性，所以我就觉得震荡仪可能不行，呵呵

niwanmao

蓝白小熊 发表于 2012-4-6 13:31

                               
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老师，你好牛哦，佩服佩服。我之前也有想过用震荡仪，不过BD老师叫我操作一定要轻柔，以免损伤细胞造成假 ...

振荡器其实是属于轻柔的涡旋，所谓的剧烈操作是把管子盖上，用手狠命的晃

蓝白小熊

niwanmao 发表于 2012-4-6 15:24

                               
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振荡器其实是属于轻柔的涡旋，所谓的剧烈操作是把管子盖上，用手狠命的晃 ...

啊，喔，呵呵，看来我把人力小瞧了

gcz5340

做周期细胞要多准备一点，比凋亡的要多，最好能有十的六次方，因为乙醇离心的时候会损失很多，离心弃上清的时候也要小心一点。