补偿和荧光强度有关系吗？

niwanmao

stef1981 发表于 2012-07-05 09:08:49

                               
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我也觉得补偿跟荧光强度有关系，倪老师说的“尽可能使用高表达某抗原的细胞来调节”，那低表达的不是就补偿

不会的，其实看看haven_t提供的图片和我画的示意图，不会存在高表达调节到位而低表达调过头的情况。应该是跟补偿的算法有关，不知道haven_t是否能够来解说一下？

haven_t

stef1981 发表于 2012-7-5 09:08

                               
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我也觉得补偿跟荧光强度有关系，倪老师说的“尽可能使用高表达某抗原的细胞来调节”，那低表达的不是就补偿 ...

如果以图形来调节补偿就肯定会过，如果以数据为标准调就不会过。

haven_t

我觉得最好还是详细问一下到底是什么关系，荧光强度大的补偿会变大还是变小。我觉得很有可能如倪兄所讲的，也是大部分Calibur用户所持有的观点，调节补偿时很多操作者喜欢和图形打交道，而不是数据，但大家忽略了数据可视化在某些情况下会对数据在视觉上造成扭曲，正如上面第一个图，其实绿色紫色和其他颜色的群体在APC-Cy7上的荧光强度都是一致的，但是在图形上的感觉就并非如此，这是因为对数坐标的关系，如果换成双指数坐标的话就像第二张图，大家就不会有那种错觉了。
其实即使用同一个标本，同时获取两次荧光强度还是有轻微差异的，所以两次运算出来的补偿也会有微小的偏差，何况是不同荧光强度运算补偿，所以没有人敢担保是完全一样的。但是这属于偶然误差，统计学上没有意义的。

FacsAriaIII

我借着这儿的气氛，也请教一下啊。附件里是同样的标本，我调了不同的电压和补偿记录的数据。specimen2调低了PE-Cy7的电压。请帮我看一下，哪种调节更合适，或者正确。或者正确的应该怎么调。
tube1：non-staining
tube2-6：single staining FITC/PE/APC/PE-Cy7/Pacificblue
tube10、14：样本

谢谢哦

haven_t

FacsAriaIII 发表于 2012-7-5 15:27

                               
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我借着这儿的气氛，也请教一下啊。附件里是同样的标本，我调了不同的电压和补偿记录的数据。specimen2调低 ...

新建文件夹1.rar里面的大致上可以吧。软件自动运算生成的补偿矩阵一般都没什么问题，除非设门有偏差。新建文件夹里面的似乎不能用FlowJo打开，奇怪！

niwanmao

haven_t 发表于 2012-7-5 10:38

                               
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如果以图形来调节补偿就肯定会过，如果以数据为标准调就不会过。

怎么以数据为标准进行调节？看GEOMEAN值？

niwanmao

FacsAriaIII 发表于 2012-7-5 15:27

                               
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我借着这儿的气氛，也请教一下啊。附件里是同样的标本，我调了不同的电压和补偿记录的数据。specimen2调低 ...

我觉得还是调低PE-CY7的电压更好一点。

FacsAriaIII

haven_t 发表于 2012-7-5 19:55

                               
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新建文件夹1.rar里面的大致上可以吧。软件自动运算生成的补偿矩阵一般都没什么问题，除非设门有偏差。新 ...

可以打开啊。1里面的，我总觉得PE-Cy7的阳性标本都太靠外面了，所以才调低了电压。但是调低了之后，又觉得阴性标本都跑到坐标轴下面了。难办。。。

FacsAriaIII

niwanmao 发表于 2012-7-5 21:22

                               
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我觉得还是调低PE-CY7的电压更好一点。

唉，为了看到阳性的舒服点，我才调低的。但是还是不满意。

haven_t

FacsAriaIII 发表于 2012-7-7 18:43

                               
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可以打开啊。1里面的，我总觉得PE-Cy7的阳性标本都太靠外面了，所以才调低了电压。但是调低了之后，又觉 ...

电压确实太高了，阴性位置还可以接受，可以改变坐标最小值以改变显示效果。