流式抗体设计

niwanmao

willow2013 发表于 2013-3-6 13:37

                               
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倪老师您上次说过，同型对照也可以用，只是效果不如FCM对照好！如果有同型对照的话，就是三种不同荧光的 ...

不是的，呵呵，你还没有理解我刚才的意思。
共三管：
第一管  空白，或者三个同型对照，用来调节电压
第二管  FITC＋其它两个非FL1通道的同型（或者同型不加也可以），调节FL2-FL1补偿
第三管  PE＋其它两个非FL2通道的同型（或者同型不加也可以），调节FL1-FL2补偿
2、3两管其实相当于FMO对照了。
由于APC跟其它两种颜色之间没有补偿，所以不需要另设FMO管

willow2013

niwanmao 发表于 2013-3-6 14:12

                               
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不是的，呵呵，你还没有理解我刚才的意思。
共三管：
第一管  空白，或者三个同型对照，用来调节电压

哦，呵呵！是这样。
我买了A-FITC，B-PE，C-APC，D-FITC，E-PE，及F-PE这些抗体，本来是想A-FITC，B-PE，C-APC一个管检测，D-FITC，E-PE一个管检测，F-PE再一个管检测，外加FITC、PE和APC同型对照一个管检测的，因为老板要我们按照他给的文献来，我看文章里的描述大体就是这样，不知道这样是不是可行

niwanmao

willow2013 发表于 2013-3-6 14:27

                               
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哦，呵呵！是这样。
我买了A-FITC，B-PE，C-APC，D-FITC，E-PE，及F-PE这些抗体，本来是想A-FITC，B-PE， ...

你检测的抗体怎么组合无所谓，我上面说的这三管是用来调节电压和补偿的，必须要这么做。至于用来调节的FITC和PE标记的抗体，尽可能选择高表达的。

willow2013

niwanmao 发表于 2013-3-6 14:35

                               
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你检测的抗体怎么组合无所谓，我上面说的这三管是用来调节电压和补偿的，必须要这么做。至于用来调节的FI ...

哦，知道了，谢谢您

刘星宇

niwanmao 发表于 2013-3-6 10:49

                               
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1、用空白管调节电压，然后用FITC单标管，调节FL2-FL1的补偿，用PE单标管，调节FL1-FL2补偿，调节补偿的时 ...

倪老师好，我觉得科研实验的抗体还是分装一下好吧，200μl/管，因为我觉得不同于临床的试剂常用，用得快，而且老师的技术成熟。对于我们新手用，分装后可以避免造成污染。个人愚见。

niwanmao

刘星宇 发表于 2013-3-6 23:02

                               
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倪老师好，我觉得科研实验的抗体还是分装一下好吧，200μl/管，因为我觉得不同于临床的试剂常用，用得快 ...

现在其实有小包装的吧，25test，或者50test的。

刘星宇

niwanmao 发表于 2013-3-6 23:05

                               
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现在其实有小包装的吧，25test，或者50test的。

很多都是100t，如果抗体减半可以做到200t，小包装太少，几个小包装加起来价格比大包装的贵。