求助：磁珠分选Treg上流式后均显示较多细胞碎片（附图）

lvhong0920

niwanmao 发表于 2013-9-11 21:22

                               
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我只知道跟仪器有关，至于为什么，你可以换台机器试试就知道了。

好，谢谢您，下次分选镜下看看细胞形态

lvhong0920

niwanmao 发表于 2013-9-10 20:01

                               
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如果不确定，可以尝试一下镜下观察细胞形态，就可以知道是不是存在碎片。反正我就觉得不象细胞碎片。 ...

您好，今天让之前分选成功的同学做了一次（说明方法没问题），结果跟之前一样（细胞还是散的）。也在显微镜下看了细胞形态，细胞形态也是正常的。不知道为什么上流式后，开始没什么问题，细胞到一万后就开始散开，会是什么原因呢？

niwanmao

lvhong0920 发表于 2013-9-16 19:03

                               
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您好，今天让之前分选成功的同学做了一次（说明方法没问题），结果跟之前一样（细胞还是散的）。也在显微 ...

哦，那是因为标本取光了，所以最后的信号都是假信号。

lvhong0920

niwanmao 发表于 2013-9-16 19:04

                               
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哦，那是因为标本取光了，所以最后的信号都是假信号。

什么意思

lvhong0920

lvhong0920 发表于 2013-9-16 19:06

                               
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什么意思

跑到10000没细胞了吗？

niwanmao

lvhong0920 发表于 2013-9-16 19:06

                               
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跑到10000没细胞了吗？

说明没跑到目的数量时，你的标本没有了，或者是非常非常微量，上样针已经吸到细胞了，此时就获取不到信号，会出现一些假信号。你注意一下出现这种信号的时候是不是标本没有了。

lvhong0920

niwanmao 发表于 2013-9-16 19:09

                               
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说明没跑到目的数量时，你的标本没有了，或者是非常非常微量，上样针已经吸到细胞了，此时就获取不到信号 ...

但是CD25的纯度也不高，今天的70%。

niwanmao

lvhong0920 发表于 2013-9-16 19:10

                               
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但是CD25的纯度也不高，今天的70%。

奇怪，怎么还没理解呢？你的CD25纯度不高，就是因为这些假信号的干扰导致，而这些假信号的源头就是因为你们未获取到指定数量（如10000个）前，标本取光了，流式细胞仪没东西好吸了，于是就出现了乱七八糟的假信号。
所以，你以后只要注意别让标本取光，即使没获取到10000个也先停掉，你的结果就没问题了。

lvhong0920

niwanmao 发表于 2013-9-16 19:09

                               
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说明没跑到目的数量时，你的标本没有了，或者是非常非常微量，上样针已经吸到细胞了，此时就获取不到信号 ...

我是取得200ul上流式的，200ul大约10000多细胞吧。是不是应该多取一些标本

lvhong0920

niwanmao 发表于 2013-9-16 19:15

                               
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奇怪，怎么还没理解呢？你的CD25纯度不高，就是因为这些假信号的干扰导致，而这些假信号的源头就是因为你 ...

没达到10000前，CD25的纯度也不高，一直都没有达到90%