流式检测转染效率

futiger

niwanmao 发表于 2014-7-7 21:04
我们这边也有研究生做转染，主要是GFP标记，基本上都是很好的双峰，不过阴性峰跟空白对照相比也是有不小 ...

倪老师，您说的流式检测转染的双峰图像有吗？我也在准备做转染，刚看到这个帖子，准备试试用流式检测下，实验室也没有荧光显微镜呵呵

niwanmao

futiger 发表于 2014-7-16 17:14
倪老师，您说的流式检测转染的双峰图像有吗？我也在准备做转染，刚看到这个帖子，准备试试用流式检测下， ...

以前他们研究生做的，所以图片我这里没有存底，不过跟BD网站上一张C6做的转染图片类似，很明显的阳性峰和阴性峰：


不过，我后来想了下，可能分群不清楚有时候也可以算，因为有些荧光蛋白可能本身就亮度不强。

futiger

niwanmao 发表于 2014-7-16 17:33
以前他们研究生做的，所以图片我这里没有存底，不过跟BD网站上一张C6做的转染图片类似，很明显的阳性峰和 ...

明白这个意思了，就是我可以将我的未转细胞、质粒转染细胞，空质粒细胞作为三个样本，未转细胞作为阴性对照，然后设界限，再观察后两者的峰值就可以了。呵呵，谢谢倪老师，过几天做一做，看看效果O(∩_∩)O~

futiger

质粒到了最近做了一次转染用流式检测了一下结果有些疑惑，用的是绿色荧光蛋白应该是FL1（FITC）上观察吧，但是貌似PE上也有信号，不知道该如何解释啊？倪老师您给看看
因为细胞是同样的所以Z1-Z4就没有分直接选定了
后来考虑是不是有碎片或者死细胞所以就选定了细胞群如图1-4