急！求助！pSTAT5染色见不到荧光信号，希望经验丰富的老.....

niwanmao

LINGHQ 发表于 2020-12-1 12:56
老师您好，万分感激您提供的方案，破膜剂洗涤、破膜剂重悬孵育抗体，我的理解就是抗体放到破膜剂中染色， ...

@tiger  指的是非甲醇类的破膜剂。

tiger

LINGHQ 发表于 2020-12-1 12:56
老师您好，万分感激您提供的方案，破膜剂洗涤、破膜剂重悬孵育抗体，我的理解就是抗体放到破膜剂中染色， ...

如果我理解没错的话，固定剂是含甲醇的，破膜剂不含甲醇。

tiger

niwanmao 发表于 2020-12-3 21:09
@tiger  指的是非甲醇类的破膜剂。

倪老师厉害

LINGHQ

飞翔 发表于 2020-12-3 18:47
现在实验结果怎么样呀，我最近也在做，实验步骤和你是一样的，前期预实验时可以明显做出来，后期做stat5 ...

我们现在预实验都没有做出来，实验暂停了，正在努力寻找优化的方向，实在不知道如何做了

LINGHQ

niwanmao 发表于 2020-12-3 21:09
@tiger  指的是非甲醇类的破膜剂。

好的，我们有相关试剂，可以安排尝试，谢谢老师

飞翔

LINGHQ 发表于 2020-12-7 14:57
我们现在预实验都没有做出来，实验暂停了，正在努力寻找优化的方向，实在不知道如何做了 ...

好的，固定剂提前预热，破膜剂提前预冷，其它的没区别。早日得到好的结果呀

飞翔

niwanmao 发表于 2020-11-27 20:43
pSTAT5很难测，市场上我记得有专门的用于磷酸化蛋白检测的破膜剂的。

倪老师，磷酸化实验刺激后必须迅速固定吧

DR-ing

不知道这个实验有没有做出好的结果，操作方案上面有没有经过好的调整。
希望楼主能够提供一些经验
谢谢

gagababy

我们用的buffer不是PBS，是专门的流式buffer，其他固定破膜都没啥区别

DR-ing

gagababy 发表于 2022-11-9 14:08
我们用的buffer不是PBS，是专门的流式buffer，其他固定破膜都没啥区别

你们的结果好吗？
有没有哪些值得关注的点呢