鱼类多倍体检测（DNA含量），十万火急！

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-4-14 22:38
BD Cycle test plus 什么价格？

具体价格忘了，印象中千元左右。
如果你在杭州的话，我可以给你一个test。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-14 22:45
具体价格忘了，印象中千元左右。
如果你在杭州的话，我可以给你一个test。 ...

我在湖州。不过test用不用没关系，我主要是在找出试验的问题出在哪，相信经过大家的努力和自己不断的实验，总归会解决这个问题的。
另外，突然想起一个问题，不知道会不会问题关键的所在：譬如我取0.1ml的血液，通过PBS2-3次的洗涤，最后加入0.1ml PBS重悬的红细胞悬液，然后不论是细胞加入乙醇还是乙醇加入细胞，都显得单细胞悬液浓度太高了，这样非常容易产生凝聚，是不是吧0.1ml的红细胞悬液用1ml甚至2-3ml的PBS来重悬，这样单细胞悬液的浓度会低一些，细胞也分散一些，只不过，这个时候是加无水乙醇至终浓度70%，还是直接加70%乙醇，二不需顾及终浓度。

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-4-14 23:10
我在湖州。不过test用不用没关系，我主要是在找出试验的问题出在哪，相信经过大家的努力和自己不断的实验 ...

直接加70％乙醇，不管终浓度。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-15 12:22
直接加70％乙醇，不管终浓度。

倪老师，细胞周期试剂盒我有的，明天打算试一下。我看到步骤是这样的：2、外周血DNA样本的制备（CycleTEST PLUS DNA Reagent Kit）
2.1 将100ul抗凝外周全血加入17×100-mm的管中；
2.2 加入1x的溶血素2ml，混匀，室温放置10分钟；
2.3 室温300g离心5分钟，吸去上清夜；
2.4 加入2mlPBS洗涤细胞1次，室温300g离心5分钟, 吸去上清夜；
2.5 加入250ul A液，轻轻混匀，不要震荡，室温静置10分钟；
2.6 加入200ul B液，轻轻混匀，不要震荡，室温静置10分钟；
2.7 加入200ul C液，轻轻混匀，不要震荡，低温（2-8℃）避光静置10分钟；
2.8 用50um尼龙网膜或35um细胞过滤器过滤细胞；
2.9低温避光放置以待上机检测。建议在加入C液后3小时内上机，上机前轻轻混匀细胞悬液。
第2.2里面加“溶血素”是为什么？这个只是针对人外周血的吧。我做的这个多倍体鉴定，本身就要红细胞核，然后测定细胞核里的DNA含量，不需要加溶血素吧。这么理解对吗？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-4-15 21:24
倪老师，细胞周期试剂盒我有的，明天打算试一下。我看到步骤是这样的：2、外周血DNA样本的制备（CycleTES ...

因为你要做红细胞，所以溶血素不能用，要把2.2～2.4这三步跳过。
最后2.8步过滤看情况，如果没有团块，也可跳过。

jordanping23

niwanmao 发表于 2014-4-15 21:44
因为你要做红细胞，所以溶血素不能用，要把2.2～2.4这三步跳过。
最后2.8步过滤看情况，如果没有团块，也 ...

洗涤都不需要了吗？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-04-15 23:28:15

                               
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洗涤都不需要了吗？

洗涤不是必要步骤，没关系的

jordanping23

BD的鞘液可以当成PBS用吧，就是比PBS筛除了细菌多了EDTA是吗？

jordanping23

细胞周期试剂盒里面的Buffer solution里面含有抗冻剂DMSO，是否可以作为样品储存液放在-80℃保存？

niwanmao

jordanping23 发表于 2014-04-16 22:48:40

                               
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细胞周期试剂盒里面的Buffer solution里面含有抗冻剂DMSO，是否可以作为样品储存液放在-80℃保存？

用buffer做标本保存液没有试过。